Nla III
Nla III är ett restriktionsenzym av typ II isolerat från Neisseria lactamica . Som en del av restriktionsmodifieringssystemet kan Nla III förhindra främmande DNA från att integreras i värdgenomet genom att skära dubbelsträngat DNA till fragment i specifika sekvenser. Detta resulterar i ytterligare nedbrytning av det fragmenterade främmande DNA:t och förhindrar det från att infektera värdgenomet.
Nla III känner igen den palindromiska och komplementära DNA-sekvensen av CATG/GTAC och skär utanför GC-basparen. Detta skärmönster resulterar i klibbiga ändar med GTAC-överhäng i 3'-änden .
Egenskaper
Nla III från N. lactamica innehåller två nyckelkomponenter: ett metylas och ett endonukleas. Metylaset är avgörande för igenkänning, medan endonukleaset används för skärning. Genen ( Nla IIIR) är 693 bp lång och skapar det specifika 5'-CATG-3'-endonukleaset. En homolog av Nla IIIR är iceA1 från Helicobacter pylori . I H. pylori finns det en liknande metylasgen som kallas hpyIM som är nedströms iceA1 . ICEA1 är ett endonukleas som också känner igen 5'-CATG-3'-sekvensen. IceA1 i H. pylori liknar den för NlaIII i N. lactamica .
Nla III innehåller ett ICEA- protein som omfattar regionen 4 till 225 aminosyror. H. pylori innehåller också samma protein. H. pylori -infektion leder ofta till gastrointestinala problem såsom magsår, gastriskt adenokarcinom och lymfom. Forskare spekulerar i att ICEA- proteiner fungerar som potentiella markörer för magcancer
Isoschizomerer
Nla III isoschizomerer känner igen och skär samma igenkänningssekvens 5'-CATG-3'. Endonukleaser som skär i denna sekvens inkluderar:
- Fael
- Fatl
- Hin1 II
- Hsp92 II
- CviA II
- IceA1
Ansökningar
NlaIII kan användas i många olika experimentella procedurer som:
- Seriell analys av genuttryck
- Molekylär kloning
- Kartläggning av restriktioner
- Genotypning
- Southern blotting
- Restriktionsfragmentlängdpolymorfism (RFLP) analys