TSI-lutning
TSI -testet ( Triple Sugar Iron ) är ett mikrobiologiskt test som grovt kallas för dess förmåga att testa en mikroorganisms förmåga att jäsa socker och att producera svavelväte . Det används ofta för att skilja enteriska bakterier inklusive Salmonella och Shigella .
Sammansättning
TSI -lutningen är ett provrör som innehåller agar , ett pH-känsligt färgämne ( fenolrött ), 1 % laktos , 1 % sackaros , 0,1 % glukos och natriumtiosulfat och järnsulfat eller järn(II)ammoniumsulfat .
Alla dessa ingredienser blandas ihop, upphettas till sterilitet och får stelna i provröret i en lutande vinkel. Den lutande formen på detta medium ger en rad ytor som antingen utsätts för syrehaltig luft i varierande grad (en aerob miljö) eller inte exponeras för luft (en anaerob miljö).
TSI-agarmedium utvecklades baserat på Kliglers järnagar, som hade använts för bestämning av laktosfermentativa bakterier, genom tillsats av sackaros för att även kunna detektera sackarosfermentativa bakterier.
Tolkning av resultat
Bakterier som fermenterar något av de tre sockerarterna i mediet kommer att producera biprodukter. Dessa biprodukter är vanligtvis syror, som kommer att ändra färgen på det röda pH-känsliga färgämnet (fenolrött) till en gul färg. Placeringen av färgförändringen skiljer syraproduktionen i samband med glukosfermentering från de sura biprodukterna av laktos- eller sackarosfermentering. Många bakterier som kan fermentera sockerarter i rörets anaeroba rumpa är enterobakterier.
Vissa bakterier använder tiosulfatanjon som en terminal elektronacceptor, vilket reducerar den till sulfid. Om detta inträffar reagerar det nybildade vätesulfiden ( H
2 S ) med järnsulfat i mediet och bildar järnsulfid , som är synlig som en svart fällning. Exempel på sulfidproducerande bakterier inkluderar Salmonella- , Proteus- , Citrobacter- och Edwardsiella -arter. Svärtning av mediet observeras nästan alltid i baken (botten) av mediet.
En bakterie som är en laktosfri fermentor och fermenterar glukos, ger initialt en gul sned/gul botten (syra/syra reaktion) efter 8 timmar men övergår sedan till en röd sned/gul botten efter 24 timmar (alkali/syra reaktion). Om det jäser både laktos och glukos resulterar det i ett gult/gult rör och förblir så på grund av den stora mängden syra som produceras i reaktionen. Svärtning av botten på grund av H 2 S-produktion kan maskera syrareaktionen (gul) i botten av röret. Salmonella enterica serovar Typhi kan resultera i svärtning av mediet vid gränsytan mellan botten och lutningen.
Under anaeroba förhållanden (som inträffar mot botten av röret) använder vissa bakterier tiosulfat som en elektronacceptor och reducerar det till vätgas. Detta är inte särskilt lösligt och kan ackumuleras som bubblor längs inokuleringsspåret, mellan agarn och glaset, eller i vätskan som ackumuleras i botten av lutningen. Väteproduktion kan lyfta agarn från rörets rumpa eller spräcka agarn (knäcka agarn). Koldioxid, om den produceras, kanske inte visas som bubblor eftersom den är mycket mer löslig i mediet.