Lysogen buljong

LB medium flaska och LB agarplatta
Platta medium agar LB

Lysogenbuljong ) ( LB är ett näringsrikt medium som främst används för tillväxt av bakterier . Dess skapare, Giuseppe Bertani, tänkte att LB skulle stå för lysogenbuljong , men LB har också kommit att i vardagsspråk betyda Luria-buljong , Lennox-buljong , livsbuljong eller Luria–Bertani-medium . Formeln för LB-mediet publicerades 1951 i Bertanis första papper om lysogeni . I den här artikeln beskrev han det modifierade single-burst-experimentet och isoleringen av fagerna P1 , P2 och P3. Han hade utvecklat LB-mediet för att optimera Shigella- tillväxt och plackbildning .

LB-mediaformuleringar har varit en industristandard för odling av Escherichia coli så långt tillbaka som på 1950-talet. Dessa medier har använts i stor utsträckning i molekylärmikrobiologitillämpningar för framställning av plasmid- DNA och rekombinanta proteiner. Det fortsätter att vara ett av de vanligaste medierna som används för att underhålla och odla rekombinanta laboratoriestammar av Escherichia coli . För fysiologiska studier bör dock användningen av LB-medium avrådas.

Det finns flera vanliga formuleringar av LB. Även om de är olika delar de i allmänhet en något liknande sammansättning av ingredienser som används för att främja tillväxt, inklusive följande:

Natriumjoner för transport och osmotisk balans tillhandahålls av natriumklorid . Trypton används för att tillhandahålla essentiella aminosyror som peptider och peptoner till de växande bakterierna, medan jästextraktet används för att tillhandahålla en uppsjö av organiska föreningar som är användbara för bakterietillväxt. Dessa föreningar inkluderar vitaminer och vissa spårämnen.

I sitt ursprungliga papper från 1951 använde Bertani 10 gram NaCl och 1 gram glukos per 1 L lösning; Luria i sin "L-buljong" från 1957 kopierade Bertanis originalrecept exakt. Recept publicerade senare har vanligtvis utelämnat glukos [ citat behövs ] .

Formel

Formuleringarna skiljer sig i allmänhet i mängden natriumklorid, vilket ger ett urval av de lämpliga osmotiska förhållandena för den speciella bakteriestammen och önskade odlingsbetingelser. De lågsaltberedda formuleringarna, Lennox och Luria, är idealiska för kulturer som kräver saltkänsliga antibiotika.

  • LB-Miller (10 g/L NaCl)
  • LB-Lennox (5 g/L NaCl)
  • LB-Luria (0,5 g/L NaCl)

Förberedelse

LB medium

Följande är en vanlig metod för beredning av 1 liter LB:

  • Mät ut följande:
  • Suspendera de fasta ämnena i ~800 ml destillerat eller avjoniserat vatten.
  • Tillsätt ytterligare destillerat vatten eller avjoniserat vatten , i en mätcylinder för att säkerställa noggrannheten, för att få totalt 1 liter.
  • Autoklavera vid 121 °C i 20 minuter.
  • Efter kylning, snurra kolven för att säkerställa blandning, och LB är redo att användas.

Justering av pH

Före autoklavering justerar vissa laboratorier pH för LB till 7,5 eller 8 med natriumhydroxid. Natriumhydroxid ger dock ingen buffertkapacitet till mediet, och detta resulterar i snabba förändringar av pH under bakterieodling. För att komma runt detta föredrar vissa laboratorier att justera pH med 5-10 mmol/L TRIS -buffert, utspädd från 1 mol/L TRIS-stam till önskat pH. Det är dock inte absolut nödvändigt att justera pH för de flesta situationer. Vissa laboratorier justerar pH till 7,0 bara som en försiktighetsåtgärd.

Eftersom buffringen med TRIS också kommer att vara i stort sett ineffektiv inför betydande bakterietillväxt, är det vanligtvis onödigt att justera pH för LB på detta speciella sätt. Som sådan kan användning av TRIS i vissa buljongrecept (särskilt när kulturen kommer att förvaras vid rumstemperatur under långa tidsperioder) betraktas som en vidskeplig procedur utan mycket vetenskaplig merit.

Se även

Hämtad från " https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Lysogeny_broth&oldid=1137408469 "