Super Optimal buljong
Super Optimal Broth ( SOB-medium ) är ett näringsrikt bakterietillväxtmedium som används för mikrobiologisk odling , vanligtvis av Escherichia coli . Denna näringsrika mikrobiella buljong innehåller peptider , aminosyror, vattenlösliga vitaminer och glukos i en lågsaltformulering. Det utvecklades av Douglas Hanahan 1983 och är en anpassad version av det vanliga LB-mediet ( lysogeny broth) . Tillväxt av E. coli i SOB- eller SOC-medium resulterar i högre transformationseffektivitet för plasmider . SOC-medium kan också användas för att regenerera Klebsiella oxytoca- stammar för förbättrad transformationseffektivitet.
Super Optimal buljong med Catabolite repression ( SOC ) är SOB med tillsatt glukos .
Sammansättning
(Siffror inom parentes är de massor som krävs för att skapa 1 liter medium)
SNYFTA
- 2 % vikt/volym trypton (20 g)
- 0,5 % vikt/volym jästextrakt (5 g)
- 8,56 mM NaCl (0,5 g) eller 10 mM NaCl (0,584 g)
- 2,5 mM KCl (0,186 g)
- dd H2O till 1000 ml
- 10 mM MgCl2 ( vattenfri: 0,952 g; hexahydrat: 2,033 g) OCH 10 mM MgS04 ( vattenfri: 1,204 g; heptahydrat: 2,465 g)
SOC
Utöver SOB-innehållet innehåller SOC även 20 mM glukos (3,603 g)
Alternativt kan SOB och SOC tillverkas genom att tillsätta små mängder koncentrerad magnesiumklorid och glukoslösningar till förberedd SOB.
pH-justering
För maximal effektivitet bör SOB/SOC-media få sitt pH justerat till 7,0 genom att tillsätta koncentrerad natriumhydroxid . Den ursprungliga litteraturen säger att det slutliga mediets pH bör vara mellan 6,8 och 7,0.
Sterilisering
Slutligen bör SOB-mediet autoklaveras vid 121 °C för att säkerställa sterilitet . Komponenterna i SOC-mediet bör inte autoklaveras tillsammans eftersom den höga temperaturen kan få glukosen att reagera med tryptiska peptider (se Maillard-reaktion ), vilket äventyrar kvaliteten. SOB och magnesium- och glukostillsatslösningar kan autoklaveras separat och blandas efteråt till slutliga koncentrationer. Komplett SOC kan filtersteriliseras genom ett 0,22 μm filter.