Endoglykosidas H
| Mannosyl-glykoprotein endo-beta-N-acetylglukosaminidas- | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| identifierare | |||||||||
| EG nr. | 3.2.1.96 | ||||||||
| CAS-nr. | 37278-88-9 | ||||||||
| Alt. namn | Endo-β-N-acetylglukosaminidas H , N,N'-diacetylchitobiosyl beta-N-acetylglukosaminidas , mannosyl-glykoprotein endo-beta-N-acetylglukosamidas, di -N-acetylkitobiosyl beta-N-acetylglukosaminidas , endo-endo-endo-endo-lucosaminidas , acetylglucosaminidas -beta-(1->4)-N-acetylglukosaminidas , mannosyl-glykoprotein 1,4-N-acetamidodeoxi-beta-D-glykohydrolas, endoglykosidas S , endo-N-acetyl-beta-D-glukosaminidas , endo-N- acetyl-beta-glukosaminidas , endo-beta-N-acetylglukosaminidas D , endo-beta-N-acetylglukosaminidas F , endo-beta-N-acetylglukosaminidas H , endo-beta-N-acetylglukosaminidas L , glykomannospeptid-4D- N-(N-acetyl-D-glukosaminyl)2-asparagin 1,4-N-acetyl-beta-glukosaminohydrolas, endoglykosidas H | ||||||||
| Databaser | |||||||||
| IntEnz | IntEnz-vy | ||||||||
| BRENDA | BRENDA inträde | ||||||||
| ExPASy | NiceZyme-vy | ||||||||
| KEGG | KEGG inträde | ||||||||
| MetaCyc | Metabolisk väg | ||||||||
| PRIAM | profil | ||||||||
| PDB- strukturer | RCSB PDB PDBe PDB summa | ||||||||
| |||||||||
Enzymet endoglykosidas H ( EC 3.2.1.96 ) är ett enzym med det systematiska namnet glykopeptid-D-mannosyl-N4-(N-acetyl-D-glukosaminyl)2-asparagin 1,4-N-acetyl-beta-glukosaminohydrolas . Det är ett mycket specifikt endoglykosidas som klyver asparaginkopplade mannosrika oligosackarider , men inte högbearbetade komplexa oligosackarider från glykoproteiner . Det används i forskningssyfte för att deglykosylera glykoproteiner och för att övervaka intracellulär proteinhandel genom den sekretoriska vägen .
Struktur och aktivitet
Endoglykosidas H isoleras från Streptomyces plicatus eller Streptomyces griseus . Dess molekylvikt är 29 000 Dalton. Den primära strukturen beskrevs av Robbins et al. år 1984.
Endoglykosidas H klyver bindningen i diacetylkitobioskärnan i oligosackariden mellan två N-acetylglukosamin (GlcNAc) subenheter direkt proximalt till asparaginresten, vilket genererar en trunkerad sockermolekyl med en N-acetylglukosaminrest kvar på asparaginen.
Den deglykosylerar mannosglykoproteiner, men graden och hastigheten av deglykosyleringen beror i hög grad på glykoproteinernas natur. Deglykosyleringshastigheten kan ökas genom denaturering av glykoproteinerna (t.ex. genom karboximetylering, sulfitolys eller genom upphettning i närvaro av natriumdodecylsulfat). Tillsatsen av 0,1 M 2-merkaptoetanol ökar i hög grad enzymaktiviteten mot glykoproteiner som innehåller inter- eller intramolekylära disulfidbryggor, till skillnad från detergenter som Triton X-100, n-Oktylglukosid eller zwitterjoniska detergenter.
Biokemiska tillämpningar
Endoglykosidas H (Endo H) används ofta av cellbiologer för att övervaka posttranslationell modifiering i Golgi-apparaten . De flesta proteiner som är avsedda för cellytan översätts av ribosomer till det grova endoplasmatiska retikulumet (ER) och translokeras till Golgi. Vid inträde i ER kopplas en molekyl innehållande 14 sockersubenheter en bloc till en asparagin på ett selektivt sätt av enzymet oligosackaryltransferas . Det är denna oligosackaridmolekyl som modifieras av en serie enzymer när proteinet rör sig genom de olika avdelningarna i Golgi-apparaten. Endoglykosidas H kan klyva varje struktur av denna oligosackarid när den bearbetas tills enzymet Golgi alfa-mannosidas II tar bort två mannossubenheter . Eftersom alla senare oligosackaridstrukturer är resistenta mot Endo H-klyvning används enzymet i stor utsträckning för att rapportera omfattningen av oligosackaridbearbetning som ett protein av intresse har genomgått.
externa länkar
Stäng enzymer
Endoglykosidaser F och D, klyver Glc-Nac
PNGase F (Peptid-N4-(N-acetyl-beta-glukosaminyl)asparagin_amidas)
