Proteaser i angiogenes
Angiogenes är processen att bilda nya blodkärl från befintliga blodkärl, bildade i vaskulogenes . Det är en mycket komplex process som involverar omfattande samspel mellan celler, lösliga faktorer och den extracellulära matrisen ( ECM). Angiogenes är kritisk under normal fysiologisk utveckling, men den förekommer också hos vuxna under inflammation , sårläkning, ischemi och vid patologiska tillstånd som reumatoid artrit , hemangiom och tumörtillväxt . Proteolys har indikerats som en av de första och mest ihållande aktiviteterna involverade i bildandet av nya blodkärl. Många proteaser inklusive matrismetalloproteinaser (MMP), en disintegrin- och metalloproteinasdomän ( ADAM ), en disintegrin- och metalloproteinasdomän med trobospondinmotiv ( ADAMTS ) och cystein- och serinproteaser är involverade i angiogenes. Denna artikel fokuserar på de viktiga och olika roller som dessa proteaser spelar i regleringen av angiogenes.
MMPs
Matrismetalloproteinaser (MMP) är en stor multigenfamilj av zinkberoende endopeptidaser . Den kollektiva MMP-familjen är kapabel att bryta ned alla kända ECM-makromolekyler. MMP-aktivitet regleras på transkriptionsnivån, posttranslationellt genom proteolytisk klyvning och av endogena inhibitorer kända som vävnadshämmare av metalloproteinaser (TIMP). Rollen av matrismetalloproteinaser och TIMPs i flera patologiska tillstånd inklusive angiogenes, tumörtillväxt och metastaser har undersökts och mycket väl beskrivits.
Matrismetalloproteinaser innehåller fem konserverade domäner /sekvensmotiv:
- Signalpeptidsekvens, som leder enzymet in i det grova endoplasmatiska retikulumet under syntes
- Propeptiddomän, som klyvs för att aktivera enzymet
- Katalytisk domän , som innehåller den konserverade Zn 2+ bindningsregionen och förmedlar enzymaktivitet
- Hemopexindomän , som tillhandahåller substratspecificiteten
- Liten gångjärnsregion, som tillåter hemopexindomänen att föra substratet till den aktiva kärnan av den katalytiska domänen
Det finns också en underfamilj av matrismetalloproteinaserna, MMP:er av membrantyp (MT-MMP) som innehåller en ytterligare transmembrandomän och en kort cytoplasmatisk domän. Efter aktivering av MMP genom avlägsnande av propeptiddomänen, regleras deras aktivitet av TIMP. TIMPs hämmar specifikt och reversibelt aktiviteten av MMP. Hittills har fyra familjemedlemmar identifierats, TIMP1–4. Alla TIMP innehåller tolv konserverade cysteinrester, som bildar sex disulfidbindningar. De C-terminala domänerna av TIMP är mycket varierande och ger sin specificitet mot föredragna MMP-mål.
ADAM/ADAMTS
ADAMs omfattar en familj av integrerade membran såväl som utsöndrade glykoproteiner som är relaterade till ormgiftmetalloproteinaser och MMP. Liksom MMPs är ADAMs sammansatta av flera konserverade domäner. De innehåller domäner av propeptid, metalloproteinas, disintegrinliknande, cysteinrika och epidermal tillväxtfaktorliknande domäner, även om variationer i domänsammansättning har observerats i icke-animaliska organismer. Membranförankrade ADAMs innehåller en transmembran- och cytoplasmatisk domän. De domäner som ingår i ADAMs-familjen har karakteriserats och avslöjat deras funktionella och strukturella roller. ADAMs innehåller en konsensussekvens som har tre histidinrester som binder till den katalytiskt essentiella zinkjonen. Propeptiden avlägsnas genom klyvning av ett furintyp som ger det aktiva enzymet. Propeptiden hos de flesta MMP:er kan klyvas av proteaser såsom trypsin , plasmin , kymotrypsin och andra MMP. ADAM deltar i en mängd olika processer för ombyggnad av cellytor, inklusive av ektodomän , reglering av tillväxtfaktortillgänglighet och förmedlar cell-matrisinteraktioner. ADAM17 och ADAM15 har nyligen identifierats i endotelceller (EC).
ADAMTS är en underfamilj av ADAM-relaterade metalloproteinaser som innehåller minst ett trombospondin typ I-sekvensupprepningsmotiv (TSR). De är utsöndrade proteiner; och TSR underlättar deras lokalisering till ECM och placerar den i omedelbar närhet av deras substrat. Funktionellt kan ADAMTS delas in i tre grupper: prokollagenaminopeptidas, aggrekanas och ADAMTS13 som klyver von Willebrand-faktor . Till skillnad från MMPs är TIMPs mer selektiva i sin förmåga att hämma ADAMs och ADAMTSs. TIMP3 kan hämma ADAM17 och 12 samt ADAMTS4 och 5 . ADAM8 och ADAM9 är inte mottagliga för hämning av TIMPs.
Andra proteolytiska enzymer
Många ytterligare klasser av enzymer har identifierats som underlättar angiogenes. De inkluderar serin-, asparagin- och proteaser av cysteintyp. Ett mycket karakteriserat exempel på serinproteasfamiljen är plasminogenaktivator - plasminsystemet , som har visat sig vara involverat i vaskulär ombyggnad . Vävnadsplasminogenaktivator (tPA) och urokinasplasminogenaktivator (urokinas, uPA) är serinproteaser som klyver och aktiverar plasminogen. Den aktiverade formen av plasminogen , plasmin, är ett omfattande proteas som kan verka på olika ECM-komponenter inklusive fibrin , kollagener , laminin , fibronektin och proteoglykaner . Dessutom kan plasmin också aktivera olika andra MMP.
Hos människor omfattar gruppen av katepsincysteinproteaser eller cysteinkatepsiner 11 familjemedlemmar, katepsinerna B , C , F , H , L1 , L2 , K , O , S , W och X/Z . Cysteinkatepsiner syntetiseras som inaktiva zymogener och aktiveras genom proteolytiskt avlägsnande av deras propeptid. Dessa enzymer är primärt lokaliserade i lysosomer och fungerar i terminal proteinnedbrytning och bearbetning. Katepsiner kan också utsöndras av celler, associeras med cellytan och bryta ned ECM. En studie av alla 11 medlemmar av katepsinfamiljen belyser deras betydelse för tumörbildning och tumörassocierad angiogenes. Undersökning av katepsinaktivitet med användning av kemiska sönder och in vivo avbildningstekniker visade en ökning av katepsinaktivitet i de angiogena blodkärlen och invasiva fronterna av karcinom i den transgena RIP-Tag2-musmodellen för tumöruppkomsten av pankreatiska öar .
Aminopeptidaser fungerar som exopeptidaser som tar bort aminosyror från aminoterminalen av proteiner. Aminopeptidas N (CD13/APN) är starkt uttryckt på endotelet hos växande kärl. Hämmare av CD13/APN försämrar dramatiskt tumörtillväxt.
Avskaffande av ektodomän
Det har blivit tydligt under de senaste åren att utsöndring av ektodomän är ett första steg för aktivering av specifika receptorer såsom Notch , ErbB-4 och angiopoietinreceptorn Tie-1. Notch-1- signalering är väsentlig för endotelial differentiering och tumörangiogenes, medan angiopoietinreceptorn Tie-1 underlättar bildning av embryonala blodkärl. Efter bindning av deras ligander genomgår Notch-1 och Tie-1 proteolytisk klyvning av ektodomänerna av ADAM17 och ADAM10 . Denna klyvning frigör det cytoplasmatiska fragmentet för cellulär signalering. I fallet med Notch-1 överförs den till kärnan.
Många cytokiner och tillväxtfaktorer syntetiseras som membranbundna proformer som genomgår proteolytisk utsöndring för aktivering. Ephrins EPH-receptorer A2 och A3 utsöndras av ADAM10, vilket skapar klyvda lösliga Eph-receptorer , som hämmar tumörangiogenes hos möss. Ytterligare exempel är proteolytisk utsöndring av lösligt E-selektin , utsöndring av urokinasreceptor (uPAR) genom MMP-12 som skapar löslig uPAR som har kemotaktiska egenskaper för leukocyter och progenitorceller, och utsöndring av interleukin-6-receptorer av ADAM10 och ADAM17 som underlättar interleukin-6-signalering i endotelceller. Semaforin 4D klyvs från sin membranbundna form av MT1-MMP (MMP-14) i tumörceller; det interagerar sedan med plexin B1 på endotelceller, vilket främjar pro-angiogen kemotaxi. Utsöndring av ett membranförankrat cytokin eller tillväxtfaktor av ADAM-proteinaser kan vara relevant för olika signaltransduktionshändelser. Alternativt kan utsöndring krävas för att liganden ska diffundera till avlägsna receptorer. Utsöndring kan krävas för nedreglering av signaler genom att ta bort signalligander, eller klyvning och frisättning av receptorer. Frisättning av receptorn kan också generera lösliga receptorer som fungerar som lockbeten genom att binda ligander. Dessa fynd indikerar att utsöndring av ektodomän är en allestädes närvarande process som underlättar en mängd olika cellulära händelser involverade i angiogenes. Eftersom potenta biologiska modifierare genereras, kontrolleras det sannolikt av en starkt reglerad mekanism. Tillsammans med ADAMs och MT-MMPs kan membranbundna serinproteaser också spela en roll i ektodomänutsöndring.
Proteolytisk nedbrytning av den extracellulära matrisen (ECM)
Bildandet av kapillärer från redan existerande blodkärl kräver ombyggnad av både det peikapillära membranet i modervenulen, såväl som den lokala och distala ECM. Vid början av angiogenes måste endotelceller (EC) omforma tre olika barriärer för att migrera och invadera målvävnaden. Först är basalmembranet mellan endotelet och vaskulära glatta muskelceller eller pericyter , följt av fibringelen som bildas av fibrinogen som läcker från kärlsystemet, och slutligen den extracellulära matrisen i målvävnaden. Det vaskulära basalmembranet är sammansatt av typ IV kollagen , typ XV kollagen, typ XVIII kollagen , lamininer , entactin , heparansulfat proteoglykaner, perlecan och osteonectin . Alla dessa komponenter i basalmembranet är substrat för bland annat MMP-2 , 3 , 7 och 9 . Inhibitorer av MMP-aktivitet har belyst betydelsen av dessa proteiner för att kontrollera angiogenes. Nyligen har det upptäckts att små störande RNA (siRNA)-medierad mål-RNA-nedbrytning av urokinasreceptor och MMP-9 hämmar bildningen av kapillärliknande strukturer i både in vitro- och in vivo -modeller av angiogenes. Efter att ha arbetat sig igenom basalmembranet måste EC invadera genom en tät fibringel som polymeriseras från fibrinogen som härrör från kärlbädden. Plasmin, ett effektivt fibrinolysin som produceras av tPA eller uPA , ansågs vara väsentligt i denna process, men möss med brist på plasminogen uppvisar inte några större defekter av neovaskularisering i fibrinrika vävnader. Dessa fynd framhäver den olika mängden proteolytiska enzymer som ECs använder för att bygga om ECM. Till exempel kan MMP-3, 7, 8 , 12 och 13 klyva fibrinogen.
MMP-aktivitet är en av de tidigaste och mest ihållande processerna som äger rum under angiogenes. Genom att studera övergången från en avaskulär till en vaskulär tumör Fang et al. kunde identifiera nyckelrollen för MMP-2 i angiogenes. MMP-2-uttryck och aktivitet ökade i angiogena tumörer jämfört med avaskulära tumörer, och tillägget av antisensoligonukleotider riktade mot MMP-2 hämmar initieringen av angiogenes som bibehåller den avaskulära fenotypen. Dessa data tillsammans med andra rapporter tyder på att MMP-aktivitet är nödvändig för att initiera de tidigaste stadierna av angiogenes och tumörutveckling. Skapandet av möss med MMP-brist har gett viktig insikt i MMP:s roll i regleringen av angiogenes. Till exempel utvecklas MMP-2 knockout-möss normalt men uppvisar signifikant hämning av hornhinneangiogenes .
Proteolytiska fragment som regulatorer av angiogenes
Många proteolytiska fragment eller domäner av ECM-proteiner har rapporterats utöva positiv eller negativ aktivitet på angiogenes. Naturliga proteiner som innehåller sådana domäner med regulatorisk aktivitet är normalt inaktiva, troligen för att de är kryptiska segment gömda i den nativa proteinstrukturen. Angiostatin är ett 38 kDa plasminogenfragment med angiogenesinhibitoraktivitet. Angiostatinfragment innehåller kringledomäner som utövar sin inhiberande aktivitet på flera olika nivåer; de hämmar migration och proliferation av endotelceller , ökar apoptos och modulerar aktiviteten av focal adhesion kinas (FAK). Endostatin är ett 20 kDa fragment av kollagen XVIII. Endostatins huvudroll är dess förmåga att kraftigt hämma endotelcellsmigration och inducera apoptos. Dessa effekter medieras genom att interagera och interferera med olika angiogena relaterade proteiner såsom integriner och serin/treonin-specifika proteinkinaser . Många studier har visat att tropoelastin , den lösliga prekursorn för elastin , eller proteolytiska elastinfragment har olika biologiska egenskaper. Nackman et al. visade att elastasgenererade elastinfragment förmedlar flera karakteristiska drag av aneurismal sjukdom som korrelerade med angiogenes. Osteonektin är ett metallbindande glykoprotein som produceras av många celltyper inklusive EC. Slutligen är endorepellin en nyligen beskriven hämmare av angiogenes härledd från karboxiterminalen av perlekan. Nanomolära koncentrationer av endorepellin hämmar EC-migrering och angiogenes i olika in vitro- och in vivo- modeller genom att blockera EC-vidhäftning till olika substrat såsom fibronektin och typ I-kollagen .
Endogena hämmare eller aktivatorer som genereras av proteolytisk nedbrytning av större proteiner mestadels från ECM har visat sig bidra till regleringen av tumörtillväxt och angiogenes. Denna artikel nämner endast en liten del av de kända proteolytiska fragmenten som förändrar EC-beteende och funktion under angiogenes. Detta överflöd har fått ökad uppmärksamhet på grund av deras potential för anti-angiogena och anti-cancerterapier.
Proteolytisk aktivering av tillväxtfaktorer
Proteaser modulerar inte bara cell-matris-interaktioner utan kan också kontrollera uppkomsten och progressionen av angiogenes genom att aktivera angiogena tillväxtfaktorer och cytokiner. Hepatocyttillväxtfaktor (HGF), en angiogenesfrämjande tillväxtfaktor, aktiveras av HGF-aktiveringsfaktor , ett serinproteas relaterat till plasminogen. Flera tillväxtfaktorer såsom grundläggande fibroblasttillväxtfaktor (bFGF) och vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF) fångas i ECM av olika proteoglykaner. Den proteolytiska nedbrytningen av dessa proteoglykaner frigör tillväxtfaktorerna så att de kan nå sina receptorer och påverka cellulärt beteende. Tillväxtfaktorer som indirekt påverkar angiogenes är också mål för proteolytisk aktivering. Till exempel driver plasminogenaktivatorer aktiveringen av latent transformerande tillväxtfaktor beta (TGF-β) från ben-ECM och modulerar sålunda angiogenes i ben.
Proteaser har inte bara förmågan att ändra tillgängligheten av tillväxtfaktorer, utan kan också modifiera deras egenskaper. Denna förmåga visades för VEGF 165 som klyvs av MMP-3 eller MMP-9 till en mindre molekyl med egenskaper liknande VEGF 121 . Dessa två isoformer av VEGF har mycket olika egenskaper. VEGF 165 inducerar ett regelbundet kärlmönster under tumörneovaskularisering. VEGF 121 och den trunkerade VEGF 165 orsakar däremot oregelbundna mönster av neovaskularisering, troligen på grund av deras oförmåga att binda heparansulfater, varför de inte tillhandahåller någon rumslig information som är begravd i ECM. En annan viktig faktor vid angiogenes, stromalcellshärledd faktor-1 (SDF-1), modifieras också av aminodipeptidaset dipeptidylpeptidas-4 (DPP4). Klyvning av SDF-1 minskar dess heparansulfataffinitet och interaktioner med dess receptor CXCR4 reduceras. ADAM-familjen av proteaser får ökad uppmärksamhet för sin förmåga att förändra balansen mellan pro- och anti-angiogena faktorer. ADAM17 kan frisätta aktiv tumörnekrosfaktor-alfa (TNFα) och heparinbindande EGF-liknande tillväxtfaktor (HB-EGF) från sina membranbundna prekursorer som indirekt kan påverka angiogenes.
Proteaser som hämmare av angiogenes
Proteaser underlättar inte bara angiogenes, utan de har också förmågan att bromsa processen. Ett exempel på detta är bearbetningen av angiogeneshämmare av MMP. Som tidigare beskrivits har MMP:er visat sig klyva plasminogen och kollagen XVIII till de endogena angiogeneshämmarna angiostatin och endostatin. MMP-2 i sig besitter anti-angiogena egenskaper som är oberoende av dess katalytiska domän. Interaktioner mellan integrin α v β 3 och MMP-2 på EC-cellytan kan vara nödvändiga för MMP-2-aktivitet under angiogenes. Den hemopexinliknande domänen i karboxiterminalen av MMP -2 kan blockera denna interaktion av aktiv MMP-2 och integrin αvβ3 på EC-ytan, vilket leder till hämning av MMP-2-aktivitet .
Under angiogenes uttrycks ADAM15 företrädesvis på EC. ADAM15 kan interagera med integrinerna α v β 3 och α 5 β 1 genom sin disintegrindomän via ett RGD ( arginin - glycin - asparaginsyra ) motiv. De flesta disintegriner innehåller detta konserverade RGD-motiv, men ADAM15 är den enda medlemmen av ADAM-familjen som innehåller detta motiv. En rekombinant disintegrindomän av human ADAM15 hämmar en mängd olika EC-funktioner in vitro inklusive proliferation, adhesion, migration och kapillärbildning. Överuttryck av ADAM15 disintegrindomän resulterade i hämning av angiogenes, tumörtillväxt och metastaser. Å andra sidan har det inte visats om fullängds ADAM15 spelar en hämmande roll in vivo . ADAMTS1 och ADAMTS8 hämmar angiogenes in vitro i två funktionella angiogenesanalyser. Båda enzymerna inhiberar bFGF-inducerad vaskularisering i hornhinnefickaanalysen och hämmar VEGF-inducerad angiogenes i korioallantoisk membrananalysen . Sammantaget indikerar dessa data att proteaser kan fungera som både positiva och negativa regulatorer av angiogenes.
Proteolys och cellmigration
Angiogenes kräver migration och invasiv tillväxt av celler. Detta underlättas av ett balanserat samspel mellan lossning och bildning av cellvidhäftningar som gör att cellen kan krypa framåt genom ECM. Cellen använder begränsad proteolytisk aktivitet vid ställen för individuella fokala adhesioner via bildandet av multiproteinkomplex. Multiproteinkomplex är lokaliserade i lipidflottor på cellytan, där membranbundna proteaser ofta är inkorporerade. Till exempel leukocyter komplex urokinas (uPA), urokinas receptor (uPAR) och integriner som deltar i celladhesion och invasion. I dessa komplex fungerar uPAR som ett organiserande centrum som bildar icke-kovalenta komplex med integriner, LRP -liknande proteiner och urokinas. Liknande komplex finns också på EC.
Okontrollerad proteolys av ECM
De proteolytiska aktiviteterna som äger rum under angiogenes kräver exakt rumslig och tidsmässig reglering. Om inte för denna kontroll kan överdriven proteolys leda till skada på vävnaden och förlust av förankringspunkter för migrerande celler. Detta illustreras av möss som har brist på plasminogenaktivatorinhibitor-1 (PAI-1). PAI-1 hämmar plasminogenaktivatorer och därmed plasminaktivering; därför kunde det antas att PAI-1-brist skulle öka angiogenes och tumörtillväxt. Oväntat, när möss med brist på PAI-1 utmanades med cancerceller på en kollagenmatris, hämmades angiogenes och vaskulär stabilisering, vilket hämmade tumörtillväxt. Detta fynd krediterades de skyddande egenskaperna som PAI-1 ger mot överdriven nedbrytning av den omgivande ECM av plasmin. Utan detta skydd förstörs de fotfästen som används av endotelceller för att migrera och bilda kapillärstrukturer. Okontrollerad proteolys tillskrivs också störningen av vaskulär utveckling och för tidiga dödsfall i murina embryon som saknar hämmaren reversion-inducerande-cysteinrikt protein med kazal-motiv ( RECK). Detta beror med största sannolikhet på okontrollerad MMP-aktivitet, eftersom en partiell räddning erhölls genom att samtidigt slå ut RECK och MMP-2.
Proteaser involverade i rekryteringen av benmärgshärledda celler under angiogenes
Leukocyter och endotel-progenitorceller (EPC) bidrar till initieringen och vägledningen av nya blodkärl. Monocyter producerar en mängd olika pro-angiogena faktorer. Det finns också en population av CD34 -positiva celler som kan uttrycka endotelassocierade proteiner, såsom VE-cadherin och kinasinsatt domänreceptor (KDR, VEGF-receptor 2) som hjälper till att påverka progressionen av angiogenes. Frånvaron eller dysfunktion av dessa celler är inblandad i försämrad vaskularisering hos hjärt- och diabetespatienter . MMP-9 spelar en nyckelroll för att mobilisera EPC från benmärgen. Heissig et al. har föreslagit en mekanism för hur MMP-9 underlättar tillgängligheten av EPC för angiogenes. För det första inducerar cirkulerande VEGF MMP-9-uttryck i benmärgen, MMP-9 kan sedan klyva och frisätta c-kit- ligand. Aktiverat c-kit kan sedan rekrytera hematopoetiska , endotel- och mastcellsprogenitorceller , dessa celler ackumuleras sedan i det angiogena området och producerar stora mängder VEGF som tippar skalan till förmån för angiogenes.
MMP-9 är inte det enda proteaset som visat sig vara involverat i EPC-förstärkt angiogenes. Cathepsin L1 är aktivt vid neutralt pH genom att associera med en p41 splitsningsvariant av den MHC klass II-associerade invarianta kedjan som är starkt uttryckt i EPC. Denna förmåga att förbli aktiv vid neutralt pH kan underlätta EPC-invasion, ombyggnad av matrixkollagener och gelatin och neovaskularisering. Knock-out av cathepsin L1 hos möss uppvisade nedsatt blodflödesåterställning i ischemiska extremiteter, vilket tyder på nedsatt neovaskularisering. Neovaskularisering är också försämrad hos möss behandlade med benmärgshärledda celler som saknar cathepsin L1 jämfört med vildtypsceller. Målet med vilket cathepsin L1 stimulerar angiogenes är ännu inte identifierat.
Mognad av nybildade blodkärl via proteaser
Det är väl etablerat att glatta muskelliknande pericyter spelar en viktig roll för att stabilisera nybildade blodkärl. Pericyter närvarande i stroma av tumörer hos bröstcancerpatienter uttrycker MMP-9. Djurmodeller som saknar MMP-9 visar störd rekrytering av pericyter. Oförmågan att rekrytera pericyter påverkar allvarligt kärlens stabilitet och graden av vaskularisering av neuroblastom . Aminopeptidas A kan också vara involverat i pericytrekrytering på grund av dess ökade uttryck av aktiverade pericyter under olika patologiska tillstånd associerade med angiogenes. Mekanismen genom vilken detta proteas underlättar kärlmognad har ännu inte fastställts. Angiogenes kräver en fin balans mellan proteolytisk aktivitet och proteinashämning. Pericyter utsöndrar TIMP-3 som hämmar MT1-MMP-beroende MMP-2-aktivering på endotelceller, vilket underlättar stabilisering av nybildade mikrokärl. Samkulturer bestående av pericyter och endotelceller inducerar uttrycket av TIMP-3 av pericyter, medan endotelceller producerar TIMP-2. Tillsammans stabiliserar dessa hämmare kärlsystemet genom att hämma en mängd olika MMP, ADAM och VEGF-receptor 2.
Omogna kärl förblir beroende av kontinuerlig exponering för angiogena tillväxtfaktorer utan pericyttäckning. När reservoaren av tillväxtfaktorer avlägsnas överlever inte endotelcellerna och genomgår kaspasinducerad apoptos, medan andra proteaser deltar i nedbrytningen och avlägsnandet av kvarvarande cellrester .
Perspektiv
Proteaser spelar många roller i angiogenes, både vid utveckling och speciellt vid patologiska tillstånd. Eftersom de är viktiga regulatorer av vävnadsnedbrytning och cellmigration, förväntas det att deras inhibering skulle vara fördelaktigt för att hämma tumörtillväxt och vaskularisering. Lovande resultat har observerats i djurstudier, men kliniska prövningar har misslyckats med att visa liknande resultat och åtföljs ofta av oacceptabla biverkningar. Detta har påverkat fortsatt forskning som har identifierat nya familjer av proteaser, såsom ADAM, ADAMTS och MT-MMP. Kanske mer signifikant, ett nytt paradigm har dykt upp för proteaser som är väsentliga för att modulera tillväxtfaktorer och cytokiner, generera biologiskt aktiva fragment från matrisen, underlätta rekrytering av benmärgshärledda celler och stabilisering av mogna blodkärl. Bättre förståelse för de olika aktiviteterna av proteaser och deras inhibitorer kommer att hjälpa till med mer skräddarsydda behandlingar för många sjukdomar.
