Isopropyl β- D -1-tiogalaktopyranosid
|
|
| Namn | |
|---|---|
|
IUPAC namn
Propan-2-yl-l-tio-p- D -galaktopyranosid
|
|
|
Föredraget IUPAC-namn
(2R , 3R , 4S , 5R , 6S ) -2-(hydroximetyl)-6-[(propan-2-yl)sulfanyl]oxan-3,4,5-triol |
|
| Identifierare | |
|
3D-modell ( JSmol )
|
|
| ChemSpider | |
| ECHA InfoCard | 100.006.094 |
| Maska | Isopropyl+tiogalaktosid |
|
PubChem CID
|
|
| UNII | |
|
CompTox Dashboard ( EPA )
|
|
|
|
|
|
| Egenskaper | |
| C9H18O5S _ _ _ _ _ _ | |
| Molar massa | 238,30 g·mol -1 |
|
Om inte annat anges ges data för material i standardtillstånd (vid 25 °C [77 °F], 100 kPa).
|
|
Isopropyl β- d -1-tiogalaktopyranosid ( IPTG ) är ett molekylärbiologiskt reagens. Denna förening är en molekylär härma av allolaktos , en laktosmetabolit som utlöser transkription av lac operonet - , och den används därför för att inducera proteinuttryck där genen är under kontroll av lac-operatorn .
Handlingsmekanism
Precis som allolaktos binder IPTG till lac-repressorn och frigör den tetramera repressorn från lac-operatorn på ett allosteriskt sätt, vilket möjliggör transkription av gener i lac-operonet, såsom genen som kodar för beta-galaktosidas , ett hydrolasenzym som katalyserar hydrolys av β-galaktosider till monosackarider. Men till skillnad från allolaktos skapar svavelatomen ( S ) en kemisk bindning som inte är hydrolyserbar av cellen, vilket hindrar cellen från att metabolisera eller bryta ned induceraren . Därför förblir dess koncentration konstant under ett experiment.
IPTG-upptag av E. coli kan vara oberoende av verkan av laktospermeas , eftersom andra transportvägar också är involverade. Vid låg koncentration kommer IPTG in i cellerna genom laktospermeas, men vid höga koncentrationer (används vanligtvis för proteininduktion) kan IPTG komma in i cellerna oberoende av laktospermeas.
Använd i laboratoriet
Vid förvaring som pulver vid 4 °C eller lägre är IPTG stabil i 5 år. Det är betydligt mindre stabilt i lösning; Sigma rekommenderar förvaring i högst en månad i rumstemperatur. IPTG är en effektiv inducerare av proteinuttryck i koncentrationsintervallet 100 μmol/L till 3,0 mmol/L . Vanligtvis tillsätts en steril, filtrerad 1 mol/L lösning av IPTG 1:1000 till en exponentiellt växande bakteriekultur, för att ge en slutkoncentration på 1 mmol/L. Koncentrationen som används beror på styrkan av induktion som krävs, såväl som genotypen av celler eller plasmid som används. Om lacIq . , en mutant som överproducerar lac-repressorn, är närvarande, kan en högre koncentration av IPTG vara nödvändig
I blå-vit skärm används IPTG tillsammans med X-gal . Blå-vit skärm tillåter att kolonier som har transformerats med den rekombinanta plasmiden snarare än en icke-rekombinant kan identifieras i kloningsexperiment. [ citat behövs ]