Autonomt replikerande sekvens

En autonomt replikerande sekvens ( ARS ) innehåller replikationsursprunget i jästgenomet . Den innehåller fyra regioner (A, B1, B2 och B3), namngivna i ordning efter deras effekt på plasmidstabiliteten . A-domänen är mycket konserverad, varje mutation tar bort ursprungsfunktionen. Mutationer på B1, B2 och B3 kommer att minska, men inte hindra ursprungets funktion.

Element A är mycket konserverat och består av konsensussekvensen:

5'- T/ATTTAYRTTTT/A -3'

(där Y antingen är pyrimidin och R är antingen purin ). När detta element är muterat förlorar ARS all aktivitet.

Som sett ovan är ARS avsevärt AT-rika vilket gör det lätt för replikativa proteiner att störa H-bindningen i det området. ORC-proteinkomplex ( ursprungsigenkänningskomplex ) är bundet till ARS under hela cellcykeln , vilket ger replikativa proteiner tillgång till ARS.

Mutationsanalys för jäst-ARS-elementen har visat att varje mutation i B1-, B2- och B3-regionerna resulterar i en minskning av funktionen av ARS-elementet. En mutation i A-regionen resulterar i en fullständig funktionsförlust.

Smältning av DNA sker inom domän B2, inducerad av bindning av ARS-bindande faktor 1 till B3. A1- och B1-domänen binder med ursprungsigenkänningskomplex.

För att identifiera dessa sekvenser transformerades jästmutanter som inte kunde syntetisera histidin med plasmider innehållande His-genen och slumpmässiga fragment av jästgenomet. Om genomfragmentet innehöll ett ursprung för replikation kunde celler växa i ett medium som saknade histidin. Dessa sekvenser kallades autonomt replikerande sekvenser, eftersom de replikerades och ärvdes av avkomma utan att integreras i värdkromosomen .