Tiosulfat – citrat – gallsalter – sackaros agar
Tiosulfat–citrat–gallsalter–sackarosagar, eller TCBS-agar , är en typ av selektiv agarodlingsplatta som används i mikrobiologiska laboratorier för att isolera Vibrio -arter. TCBS-agar är mycket selektiv för isolering av V. cholerae och V. parahaemolyticus såväl som andra Vibrio- arter. Bortsett från TCBS-agar, används andra snabbtestade mätstickor som immunokromatografisk mätsticka också i endemiska områden som Asien, Afrika och Latinamerika. Men TCBS-agarstudie krävs för bekräftelse. Detta blir oerhört viktigt i fall av gastroenterit orsakad av campylobacter-arter, vars symtom efterliknar kolera. Eftersom ingen gul bakterietillväxt observeras i händelse av campylobacter-arter på TCBS-agar, kan chanserna för felaktig diagnos rättas till. TCBS-agar innehåller höga koncentrationer av natriumtiosulfat och natriumcitrat för att hämma tillväxten av Enterobacteriaceae . Hämning av grampositiva bakterier uppnås genom inkorporering av oxgall , som är ett naturligt förekommande ämne som innehåller en blandning av gallsalter och natriumcholat , ett rent gallsalt . Natriumtiosulfat fungerar också som en svavelkälla och dess närvaro, i kombination med järn(III)citrat, möjliggör enkel detektering av vätesulfidproduktion . Sackaros ( sackaros ) ingår som ett fermenterbart kolhydrat för metabolism av Vibrio -arter. Mediets alkaliska pH ökar återhämtningen av V. cholerae och hämmar tillväxten av andra . Tymolblått och bromtymolblått ingår som indikatorer på pH-förändringar.
Formel
- Ungefärliga mängder per liter
- Jästextrakt 5,0 g
- Proteose Pepton 10,0 g
- Natriumtiosulfat 10,0 g
- Natriumcitrat 10,0 g
- Oxgall 5,0 g
- Natriumcholat 3,0 g
- Sackaros 20,0 g
- Natriumklorid 10,0 g
- Järn(III)citrat 1,0 g
- Bromtymolblått 0,04 g
- Tymolblått 0,04 g
- Agar 15,0 g
pH 8,6 ± 0,2 vid 25 °C
Förväntade resultat
- Typisk kolonimorfologi
- V. cholerae : Stora gula kolonier.
- V. parahaemolyticus : Kolonier med blå till gröna centra.
- V. alginolyticus : Stora gula mucoidala kolonier.
- V. harveyi / V. fischeri : Grågröna till blågröna kolonier som visar luminescens i mörker. Äldre kolonier misslyckas med att visa bioluminescens.
- Proteus / Enterokocker : Partiell hämning. Vid tillväxt är kolonierna små och gula till genomskinliga.
- Pseudomonas / Aeromonas : Partiell hämning. Om tillväxt, kolonier är blå.
Bakterier som inte är Vibrio men som producerar svavelväte växer som små svarta kolonier. Detta beror på att svavelväte som produceras av tiosulfat, som fungerar som en svavelkälla och skapar en reducerad syrespänning där Vibrio kan växa på grund av sin fakultativa anaeroba natur, kombineras med järn(III)joner från järn(III)citrat för att producera järn(III)sulfid, som är svart. .
TCBS-agar är både selektiv och differentiell. Det är mycket selektivt för Vibrio -arter och differentierar på grund av närvaron av sackaros och färgämnen. Sackarosjäsning producerar syra, som omvandlar färgen på bromtymolblått eller tymolblått. Två färgämnen snarare än ett gör att mediet producerar en uppsättning gult, grönt eller blått så att det är möjligt att skilja mellan olika Vibrio -arter.
Kontroll av Acanthaster planci
TCBS-agar har också använts för att kontrollera utbrott av havsstjärnan från törnen ( Acanthaster planci) , som är ett hot mot korallreven. Enstaka injektioner leder till dödsfall för sjöstjärnor inom 24 timmar, med symtom på "missfärgad och nekrotisk hud, sårbildning, förlust av kroppsturgor, ansamling av färglöst slem på många ryggrader, särskilt i spetsen, och förlust av ryggar. Blåsor på rygghöljet bröt igenom hudytan och resulterade i stora, öppna sår som exponerade de inre organen." Detta berodde på främjandet av tillväxten av naturligt förekommande Vibrio -arter till höga tätheter, med efterföljande symbiontobalans.