Testin
| TES | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Identifierare | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| , TESS, TESS-2, testin LIM-domänprotein | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Externa ID:n | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Wikidata | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Testin, även känt som TESS , är ett protein som hos människor kodas av TES -genen på kromosom 7 . TES är ett 47 kDa protein som består av 421 aminosyror som finns vid fokala adhesioner och tros ha en roll i regleringen av cellmotilitet . Utöver detta fungerar TES som en tumörsuppressor . TES - genen är belägen inom en ömtålig region av kromosom 7 , och promotorelementen i TES -genen har visat sig vara mottagliga för metylering - detta förhindrar uttrycket av TES-proteinet. TES blev mer framträdande mot slutet av 2007 då en potentiell mekanism för dess tumörsuppressorfunktion publicerades.
Domänorganisation
Tes består av följande domäner:
| Domän namn | Gränser | Domäntyp |
|---|---|---|
| Cysteinrik domän | 1–90 | Ingen homologi |
| PET-domän | 90–200 | PET-domän – ingen struktur |
| Länkare . | 201–233 | ingen domän |
| LIM1 | 234–300 | LIM-domän |
| LIM2 | 300–365 | LIM-domän |
| LIM3 | 366–421 | LIM-domän |
Strukturerna för den cysteinrika domänen och PET-domänen är inte kända. LIM-domäner är emellertid kända som modulatorer av proteininteraktioner. LIM-domänen består av 2 zinkfingrar separerade av 2 hydrofoba aminosyror (vanligtvis en fenylalanin och sedan en leucin ).
Bindande partners
TES verkar inte vara ett enzym ; snarare är det ett protein som förmedlar/reglerar cellulära funktioner via protein–proteininteraktioner . Dra ner experiment avslöjar att TES har förmodade interaktioner medierade av den angivna domänen:
| Partner | Domän | ref | Metod |
|---|---|---|---|
| mENA/VASP | LIM3 | Jäst två Hybrid , Pull-down-analys , Struktur , ITC | |
| Arp7a | ??? | Jäst två Hybrid | |
| Zyxin | LIM1 | Jäst två Hybrid , Pull-down-analys | |
| Actin | SÄLLSKAPSDJUR? | Pull-down analys | |
| a-aktinin | SÄLLSKAPSDJUR? | Pull-down analys | |
| Paxillin | SÄLLSKAPSDJUR? | Pull-down analys |
Garvalov et al. visade att interaktionen mellan TES och zyxin var direkt, med användning av rekombinanta proteiner uttryckta i E. coli .
Några av de potentiella bindningspartnerna (Zyxin, mENA) kan hittas i fokala adhesionskomplex ; utbudet av bindningspartners indikerar en potentiell roll för TES mellan "privilegierad" aktinpolymerisation och fokala adhesionskontakter till den extracellulära matrisen . Detta överensstämmer med observationen att GFP -märkt TES kan ses vid fokala vidhäftningar.
TES som en tumörsuppressor
I december 2007, Boeda, Briggs et al. visade att den tredje LIM-domänen av TES förskjuter Mena från dess vanliga subcellulära positioner ( fokala vidhäftningar eller cellens framkant). ENA/VASP-proteinfamiljen (varav Mena är medlem) är förankrade till specifika proteiner i cellen av ett peptidmotiv som består av en fenylalaninrest , följt av fyra prolinrester – känd som ett FPPPP-motiv. Det är EVH1-domänerna av VASP/EVL-proteiner som direkt kontaktar FPPPP-motivet. Den exakta arkitekturen för TES:MENA-bindning avslöjades genom röntgenkristallografi och visade att den 3:e LIM-domänen av TES täckte FPPPP-bindningsstället inom Menas EVH1-domän. Isotermisk titreringskalorimetri visade att TES har en större affinitet för Mena än dess kanoniska FPPPP-ligand, som presenteras i det fokala adhesionsproteinet zyxin. Med hjälp av mikroskopi visades det att antingen överuttryck av GFP -märkt TES eller bara den märkta tredje LIM-domänen fördrev Mena från fokala vidhäftningar och minskade medelcellhastigheten.
Dessa fynd var signifikanta med tanke på att Mena ofta överuttrycks i cancerceller och tros vara delvis ansvarig för cancercellers motilitet och därför en faktor i cancermetastaser . TES produceras omvänt ofta inte i cancerceller. Det är möjligt att ett läkemedel utformat för att efterlikna TES:s interaktion med Mena skulle kunna användas för att förhindra metastaser och därmed utveckling av sekundära tumörer hos cancerpatienter. Arbetet rapporterades brett i brittisk press (arbetet utfördes av Cancer Research UK ), och även i internationell press.
Konformationsförändring
Baserat på observationerna som: [ citat behövs ]
- Däggdjurscell-härledd TES-bindande Zyxin
- E. coli -producerad rekombinant TES (rTES) binder inte Zyxin
- En rTES-konstruktion som består av resterna 201–421 (dvs länken och alla 3 LIM-domänerna) binder Zyxin
- Ovanstående rTES-konstruktion binder en N-terminal rTES-konstruktion, bestående av de cysteinrika och PET-domänerna - IE, de två halvorna av TES interagerar med varandra .
Garvalov et al. föreslår att TES existerar i två konformationstillstånd: ett "stängt" tillstånd där N & C-halvorna av TES interagerar, döljer Zyxin-bindningsstället i LIM1, och ett "öppet" tillstånd där Zyxin-bindningsstället är tillgängligt och de två halvorna inte -Längre interagera på samma sätt, om alls. Den regleringsmekanism som växlar mellan de två staterna är för närvarande inte helt klarlagd.
Fenotyp
I RNAi -experiment visade celler som hade försämrat TES-uttryck en oförmåga att korrekt organisera sina fokala vidhäftningar och aktinstressfibrer .
I gen-knockout-experiment visade transgena möss som saknade båda kopiorna av TES-genen en ökad känslighet för tumörbildning när de utmanades med ett cancerframkallande ämne. Möss som behöll TES-genen var mindre mottagliga: TES är således en tumörsuppressorgen.