Allofykocyanin
Allophycocyanin ("annat algblått protein"; från grekiska : ἄλλος (allos) som betyder "annat", φύκος (phykos) som betyder "alg" och κυανός (kyanos) som betyder "blått") är ett protein från familjen ljusskördande proteiner phycobilprotein , tillsammans med fykocyanin , fykoerytrin och fykoerytrocyanin . Det är ett tillbehörspigment till klorofyll . Alla phycobiliproteins är vattenlösliga och kan därför inte existera i membranet som karotenoider , utan aggregerar och bildar kluster som fäster vid membranet som kallas phycobilisomes . Allophycocyanin absorberar och avger rött ljus (650 respektive 660 nm max), och finns lätt i cyanobakterier (även kallade blågröna alger) och röda alger . Phycobilin-pigment har fluorescerande egenskaper som används i immunanalyssatser . Inom flödescytometri förkortas det ofta APC. För att kunna användas effektivt i applikationer som FACS , High-Throughput Screening (HTS) och mikroskopi måste APC vara kemiskt tvärbunden.
Strukturella egenskaper
Allofycocyanin kan isoleras från olika arter av röda eller blågröna alger, som var och en producerar något olika former av molekylen. Den är sammansatt av två olika subenheter (α och β) där varje subenhet har en phycocyanobilin (PCB) kromofor. Subenhetsstrukturen för APC har bestämts som (αβ) 3 . Molekylvikten för APC är 105 000 Dalton.
Spektrala egenskaper
| Absorption maximalt | 652 nm |
| Ytterligare absorptionstopp | 625 nm |
| Utsläpp maximalt | 657,5 nm |
| Stokes Shift | 5,5 nm |
| Extinktionskoefficient | 700 000 M −1 cm −1 |
| Kvantutbyte | 0,68 |
| Ljusstyrka | 1,6 x 10 5 M −1 cm −1 |
Tvärbunden APC
Såsom nämnts ovan, för att APC ska vara användbart i immunanalyser måste det först tvärbindas kemiskt för att förhindra att det dissocierar till dess komponentsubenheter när det finns i vanliga fysiologiska buffertar. Den konventionella metoden för att åstadkomma detta är genom en destruktiv process där den behandlade APC-trimeren sönderdelas kemiskt i 8M urea och sedan får återassocieras igenom i en fysiologisk buffert. En alternativ metod kan användas som bevarar APC-trimerens strukturella integritet och möjliggör en ljusare, mer stabil slutprodukt.
Ansökningar
Många applikationer och instrument utvecklades specifikt för Allophycocyanin. Det används vanligtvis i immunanalyser såsom FACS , flödescytometri och screening med hög genomströmning som en acceptor för Europium via TR-FRET -analyser (Time Resolved-Fluorescence Resonance Energy Transfer).