U937 (cellinje)
U-937-celler är en pro-monocytisk modellcellinje som används i biomedicinsk forskning . De isolerades från histiocytiskt lymfom hos en 37-årig manlig patient 1974. På grund av den relativa enhetligheten hos expanderade kulturer och lägre underhållskrav har dessa celler sedan använts som ett viktigt verktyg för att studera fagocytdifferentiering och olika typer av celler -till-cell interaktioner. U-937-celler mognar och differentierar som svar på ett antal lösliga stimuli och antar morfologin och egenskaperna hos monocyter , makrofager eller dendritiska celler .
U-937-celler är av myeloid härstamning och utsöndrar således ett stort antal cytokiner och kemokiner antingen konstitutivt (t.ex. IL-1 och GM-CSF ) eller som svar på lösliga stimuli. TNFa och rekombinant GM-CSF främjar till exempel oberoende IL-10- produktion i U937-celler. Denna cellinje används därför i stor utsträckning för avläsning av cytokinnivåer som ett resultat av exponering för olika kemiska föreningar. Produktionen av IL-ip , IL-6 , IL-8 , IL-10 , TNF-a , iNOS , COX-2 och NF-KB mäts nämligen vanligtvis.
- celler bär t(10;11)(p13;q14) -translokationen som orsakar en fusion av MLLT10 och Ap-3-liknande klatrinmontageprotein PICALM . HLA- allelerna som finns i U-937-celler är HLA-A*03:01, A*31:01, B*18:01, B*51:01, Cw*01:02 och Cw*07:02.
Underhåll & differentiering
U-937-linjen kan odlas in vitro i upp till 3 månader eller förvaras fryst i -80°C i flera år enligt ett lämpligt protokoll. RPMI 1640 eller alternativt DMEM- media kan användas, båda kompletterade med 10 % FBS och antibiotika (vanligen penicillin eller streptomycin ). I vissa fall är ett annat tillägg som kan användas zwitterjonisk buffert – HEPES .
Differentieringsinduktion
Induktion av differentiering av U-937 till monocyter eller makrofager kan uppnås med olika medel såsom PMA (forbol 12-myristat 13-acetat), retinsyra , vitamin D3 (1,25-dihydroxivitamin D3) eller TPA (12-O- tetradekanoylforbol13-acetat). Ytterligare differentiering till dendritiska celler kan induceras genom att exponera dem för självpeptid från apolipoprotein E ( Epl.B). Denna behandling leder till förändringar i ytmarköruttryck och inducerar således förvärv av DC-liknande morfologi.
Förutom celltyperna som nämns ovan kan U-937-celler differentieras till osteoklaster – cellsubtyp som är avgörande för benresorption och ombyggnad. Denna fenotyp kan uppnås genom att kombinera stimulering med PMA och vitamin D3 med tillsats av magnesium , vilket ytterligare kan vidmakthålla differentieringsprocessen.
Specialfunktioner och användning i forskning
På grund av begränsade möjligheter att erhålla primära makrofager är U-937-cellinjen, vid sidan av THP-1- cellerna, ett avgörande verktyg för att studera dessa fagocyter in vitro . Det bör emellertid beaktas att båda nämnda cellinjer erbjuder distinkta resultat efter odlingen. U-937-härledda makrofager svarar preferentiellt på M2-inducerande stimuli, vilket leder till att de förvärvar fenotypen av alternativt aktiverade makrofager . Medan, i fallet med THP-1-celler, är polarisationen omvänd till förmån för klassiska M1-makrofager . Båda cellinjerna kan dock artificiellt polariseras i båda riktningarna. Den enda skillnaden är att M1-fenotypetableringen i U-937-härledda makrofager inte kommer att vara lika stark som i THP-1, och vice versa.
Leukemi
Enligt Si et al. (2022) skulle U-937-cellinjen specifikt kunna vara en lovande modell för akut myeloid leukemi , eftersom den visades aktivt uttrycka den JAK3 M511I- aktiverade mutationen som observerats hos cirka 10 % av AML-patienterna. I denna studie bekräftar de också att U-937-cellerna reagerar på en modell JAK3-hämmare, och deras spridning försämras därför av det.
Fagocytos
Som nämnts tidigare är U-937 ett värdefullt verktyg för att bredda kunskapen om fagocyter . En av de egenskaper som är särskilt värda att studera är deras förmåga att ROS (reactive oxygen species) som en del av ett icke-specifikt immunsvar . Prasad et al. (2020) presenterar de nuvarande möjligheterna för ROS-avbildning i dessa celler via elektronparamagnetisk resonansspektroskopi och konfokal laserskanningsmikroskopi .
Apoptos
U-937V är en variantcellinje som härrör från de ursprungliga U-937-cellerna, skillnaden är deras ökade mottaglighet för effekterna av TNFa. Det unika med dessa celler är frånvaron av cellulär sönderdelning som ett åtföljande fenomen av apoptos . Det har dokumenterats att de grundläggande molekylära processerna (nedbrytning av DNA , PS- externisering, kaspasaktivitet eller CytC- frisättning) efter induktionen av apoptos inte förändras drastiskt i dessa celler. Denna subtyp skulle därför kunna fungera som en bra modell för reglering av apoptotisk kroppsbildning eller blebbing .