Primosom

Inom molekylärbiologi är en primosom ett proteinkomplex som ansvarar för att skapa RNA- primrar på enkelsträngat DNA under DNA-replikation .

Primosomen består av sju proteiner: DnaG primas , DnaB helicase , DnaC helicase assistant, DnaT, PriA, Pri B och PriC. Vid varje replikationsgaffel används primosomen en gång på den ledande DNA -strängen och upprepade gånger, vilket initierar varje Okazaki-fragment , på den eftersläpande DNA- strängen. Initialt binder komplexet som bildas av PriA, PriB och PriC till DNA. Sedan fäster DnaB-DnaC-helikaskomplexet tillsammans med DnaT. Denna struktur kallas pre-primosomen. Slutligen DnaG att binda till pre-primosomen och bilda en komplett primosom. Primosomen fäster 1-10 RNA-nukleotider till det enkelsträngade DNA:t som skapar en DNA-RNA-hybrid. Denna sekvens av RNA används som en primer för att initiera DNA-polymeras III . RNA-baserna ersätts slutligen med DNA-baser av RNas H -nukleas (eukaryoter) eller DNA-polymeras I- nukleas (prokaryoter). DNA Ligas verkar sedan för att förena de två ändarna.

Montering av Escherichia coli- primosomen kräver sex proteiner, PriA, PriB, PriC, DnaB, DnaC och DnaT, som verkar på ett primosommonteringsställe (pas) på ett SSB-belagt enkelsträngat (8s) DNA. Montering initieras av interaktioner av PriA och PriB med ssDNA och pas. PriC, DnaB, DnaC och DnaT verkar sedan på PriAPriB-DNA-komplexet för att ge primosomen.

Primosomer är nukleoproteinsammansättningar som aktiverar DNA-replikationsgafflar. Deras primära roll är att rekrytera det replikativa helikaset på enkelsträngat DNA. Primosomen "replikationsomstart", definierad i Escherichia coli , är involverad i reaktiveringen av stoppade replikationsgafflar. Bindning av PriA-proteinet till gaffelformigt DNA utlöser dess montering. PriA är bevarat i bakterier, men dess primosomala partners är det inte. I Bacillus subtilis har genetisk analys avslöjat tre primosomala proteiner, DnaB , DnaD och DnaI , som inte har några uppenbara homologer i E. coli . De är involverade i primosomfunktion både vid arresterade replikationsgafflar och vid det kromosomala ursprunget. Vår biokemiska analys av DnaB- och DnaD-proteinerna avslöjar deras roll i primosomsammansättningen. De är båda multimera och binder individuellt till DNA. Dessutom stimulerar DnaD DnaB-bindningsaktiviteter. Enbart DnaD och DnaD/DnaB-paret interagerar specifikt med PriA från B. subtilis på flera DNA-substrat. Detta antyder att nukleoproteinsammansättningen är sekventiell i PriA, DnaD, DnaB-ordningen. Det föredragna DNA-substratet efterliknar en stoppad DNA-replikationsgaffel med oreplicerad eftersläpande sträng, strukturellt identisk med en produkt av rekombinationell reparation av en avstannad replikationsgaffel.