Negativ fläck

Inom mikroskopi är negativ färgning en etablerad metod, som ofta används i diagnostisk mikroskopi, för att kontrastera ett tunt prov med en optiskt ogenomskinlig vätska . I denna teknik färgas bakgrunden, vilket lämnar det faktiska exemplaret orört och därmed synligt. Detta står i kontrast till positiv färgning , där det faktiska provet färgas.

Ljusfältsmikroskopi

För ljusfältsmikroskopi utförs negativ färgning vanligtvis med en svart bläckvätska som nigrosin och India ink . Provet, såsom en våt bakteriekultur spridd på ett objektglas, blandas med den negativa färgen och får torka. När de ses med mikroskopet verkar bakteriecellerna, och kanske deras sporer , ljusa mot den mörka omgivande bakgrunden. En alternativ metod har utvecklats med hjälp av en vanlig vattentät märkpenna för att leverera den negativa fläcken.

Transmissionselektronmikroskopi

I fallet med transmissionselektronmikroskopi är opakheten för elektroner relaterad till atomnumret, dvs antalet protoner. Några lämpliga negativa fläckar inkluderar ammoniummolybdat , uranylacetat , uranylformiat , fosfovolframsyra , osmiumtetroxid , osmiumferricyanid och aurogluktionat. Dessa har valts för att de sprider elektroner starkt och även adsorberar till biologiskt material väl. De strukturer som kan färgas negativt är mycket mindre än de som studerats med ljusmikroskopet. Här används metoden för att se virus , bakterier, bakteriella flageller , biologiska membranstrukturer och proteiner eller proteinaggregat, som alla har en låg elektronspridningsförmåga. Vissa fläckar, som osmiumtetroxid och osmiumferricyanid, är mycket kemiskt aktiva. Som starka oxidanter tvärbinder de lipider huvudsakligen genom att reagera med omättade kol-kolbindningar och därigenom både fixerar biologiska membran på plats i vävnadsprover och färgar dem samtidigt.

Valet av negativ färg i elektronmikroskopi kan vara mycket viktigt. En tidig studie av växtvirus med negativt färgade bladdippar från en sjuk växt visade endast sfäriska virus med en fläck och endast stavformade virus med en annan. Den verifierade slutsatsen var att denna växt led av en blandad infektion av två separata virus. Negativ färgning på både ljusmikroskop- och elektronmikroskopnivå ska aldrig utföras med infektiösa organismer om inte strikta säkerhetsåtgärder följs. Negativ färgning är vanligtvis en mycket mild beredningsmetod och minskar således inte risken för operatörsinfektion.

Andra applikationer

Identifiering av lamellära (le), omvänd- miceller (M) och omvänd- hexagonala H-II-cylindrar (H) lipidfaser genom negativ färgning.

Negativ färgningstransmissionselektronmikroskopi har också framgångsrikt använts för studier och identifiering av vattenhaltiga lipidaggregat som lamellära liposomer (le), inverterade sfäriska miceller (M) och inverterade hexagonala HII-cylindriska (H) faser (se figur).

externa länkar

"Negativ färgning för dummies" . Hämtad 2009-06-06 .
"Negativ färgning" . Arkiverad från originalet 2012-12-25 . Hämtad 2009-06-06 .