YES och YAS analys
Yeast estrogen screen (YES) och Yeast androgen screen ( YAS) är in vitro screening som har utvecklats för att detektera östrogena respektive androgena aktiviteter av naturliga och syntetiska föreningar, blandningar och miljöprover.
Testet är baserat på genetiskt modifierade jästceller ( Saccharomyces cerevisiae ), som innehåller genen för den mänskliga östrogen- eller androgenreceptorn kopplad till en reportergen (t.ex. lacZ ). Aktivering av receptorn initierar en kaskad av händelser som leder till expression av reportergenprodukten (t.ex. β-galktosidas ) som omvandlar ett substrat (t.ex. CPRG) vilket leder till en mätbar färgförändring från gult till rött i mediet. Alternativa system är baserade på generering av en luminescenssignal. Aktiverande (agonistiska) prover kan mätas direkt; hämmande (antagonistiska) aktiviteter mäts som minskningen av färgutveckling i närvaro av en känd aktiverande substans.
Analysformat
YES/YAS-analysen utförs i mikrotiterplattor med 96 brunnar. Den totala analystiden är vanligtvis 2–3 dagar, men snabbare protokoll (18 timmars exponeringstid) med inducerad cellys har utvecklats. Flera jästcellinjer har utvecklats för YES- och YAS-analysen, både proprietära och allmänt tillgängliga. Kommersiella kit med alla nödvändiga ingredienser och detaljerade instruktioner finns också tillgängliga.
Relevans
Ämnen med en aktiverande eller hämmande effekt på östrogen- och/eller androgenreceptorn hos organismer kan störa reproduktionen, påverka ämnesomsättningen och immunsystemet och inducera bildningen av tumörer. Denna analys är lämplig för att detektera många naturliga och syntetiska hormonellt aktiva substanser såsom miljögifter från vardagsprodukter, t.ex. p- pilleringredienser ( 17α-etinylestradiol ), syntetiska material ( bisfenol A , ftalater ), bekämpningsmedel (metoxiklor) och nonjoniska ytaktiva ämnen ( alkylfenoler ). Testet har en god reproducerbarhet och överensstämmelse med litteraturdata för in vivo eller in vitro data.
Fördelar
Analysen har en mycket god känslighet (detektionsgräns för 17β-östradiol i YES-analysen ca 5 x 10 −12 M eller 1,4 ng/L), och mikroplattformatet kräver endast små mängder prov. Analys av inhemska vattenhaltiga prover, koncentrerade miljöprover och kemikalier eller blandningar i lösningsmedel som etanol eller DMSO är möjlig. Resultat kan erhållas så snabbt som efter en exponering över natten. Hanteringen av jästceller är i allmänhet mindre krävande än cellodling från däggdjur.
Riktlinjer och litteratur
Inga internationella standarder finns tillgängliga hittills. En ISO- riktlinje för YES-analysen är under förberedelse.