Torkad blodfläck
Testning av torkade blodfläckar (DBS) är en form av biosampling där blodprover blottas och torkas på filterpapper. De torkade proverna kan enkelt skickas till ett analyslaboratorium och analyseras med olika metoder som DNA-amplifiering eller HPLC .
Historia
Ivar Bang beskrev DBS först som en ovanlig provtagningsmetod 1913. Konceptet att kapillärblod, erhållet genom att sticka hälen eller fingret och lät på filterpapper, kunde användas för att screena för metabola sjukdomar i stora populationer av nyfödda introducerades i Skottland av Robert Guthrie 1963. Neonatal screening för fenylketonuri blev rikstäckande 1969–70. Sedan dess Guthrie- kortprover rutinmässigt samlats in från spädbarn i över 20 länder för att screena för fenylketonuri och på senare tid för medfödd hypotyreos , sicklecellstörningar och HIV-infektion. Begränsningarna av känslighet och specificitet vid screening av så små volymer blod begränsade användningen av torkade blodfläckar under många år. Emellertid har nya framsteg såsom produktionen av monoklonala antikroppar , uttryck av syntetiska proteiner och införandet av polymeraskedjereaktionen övervunnit många av dessa problem.
Denna typ av blodtester är nu tillgänglig för användning hemma av konsumenter i USA. Tillgängliga blodtester inkluderar vitamin D, östrogen, testosteron, kortisol, TSH och lipider. New York är den enda delstaten som förbjuder blodfläckstestning i hemmet. [ citat behövs ]
Procedur
Torkade blodfläckprover tas genom att applicera några droppar blod, dragna med lansett från fingret, hälen eller tån, på speciellt tillverkat absorberande filterpapper. Blodet får noggrant mätta papperet och lufttorkas i flera timmar. Prover förvaras i plastpåsar med låg gaspermeabilitet med av torkmedel för att minska luftfuktigheten och kan förvaras vid omgivningstemperatur, även i tropiska klimat. [ citat behövs ]
Väl i laboratoriet separerar tekniker en liten skiva av mättat papper från arket med hjälp av en automatiserad eller manuell hålslagning och tappar skivan i en plattbottnad mikrotiterplatta. Blodet elueras ut i fosfatbuffrad saltlösning innehållande 0,05 % Tween 80 och 0,005 % natriumazid , över natten vid 4°C. Den resulterande plattan som innehåller eluaten bildar "master" från vilken spädningar kan göras för efterföljande testning.
Som ett alternativ till att stansa ut en pappersskiva extraherar nya automationslösningar provet genom att spola en eluent genom filtret utan att stansa ut det. En automatisering inklusive tillämpning av en intern standard för utvinning utvecklades av det schweiziska företaget CAMAG.
Torkad blodfläcktestning för HIV-infektion
Tekniken lovar att utöka diagnostiska tjänster till HIV-smittade spädbarn i resurssvaga miljöer på grund av provernas längre livslängd med minskat behov av kylning och testets mindre invasiva karaktär jämfört med andra metoder. Till skillnad från ELISA- tester för HIV-antikroppar i blodet, som kan överföras till spädbarn under graviditeten oberoende av själva viruset, kan testning av torkade blodfläckar användas för att upptäcka genetiskt material från det faktiska viruset, och därigenom undvika sannolikheten för ett falskt positivt resultat . Fläcktestning av torkat blod för HIV anses inte vara tillräckligt känsligt för diagnostisk testning, men kan vara användbart för att uppskatta prevalensen av HIV genom övervakning. DBS-prover utgör också mindre av en biologisk risk för hanterare och är lättare att transportera eller lagra än flytande blodprover.
Torkad blodfläck för biobank
DBS är attraktiva för biobanker på grund av sin låga kostnad och lättanvända insamling och lagring. En studie visade att de enkelt kunde samla in stora mängder torkade blodprover av givarna. Det potentiella medicinska värdet av sådana biobanker är stort på grund av deras förmåga att upptäcka proteinnivåer och andra biomarkörer i blodet.
Princip
Orsaken till stabiliteten hos DNA, RNA eller protein kan tillskrivas det faktum att det biologiska materialet binder till filterpapperets matris och torkningsprocessen utesluter vatten, vilket är en viktig faktor som är nödvändig för att proteas eller nukleas ska verka. Bindning av det biologiska materialet binder också flera inhibitorer som kan interferera med olika nukleinsyraamplifieringsmetoder. [ citat behövs ]