Replika plätering
Replikplätering är en mikrobiologisk teknik där en eller flera sekundära petriplattor som innehåller olika fasta ( agarbaserade ) selektiva tillväxtmedier (som saknar näringsämnen eller innehåller kemiska tillväxthämmare som antibiotika ) inokuleras med samma kolonier av mikroorganismer från en primär platta ( eller master maträtt), som återger det ursprungliga rumsliga mönstret av kolonier. Tekniken går ut på att trycka på en sammetstäckt skiva och sedan trycka på sekundära plattor med celler i kolonier som tagits bort från den ursprungliga plattan av materialet. I allmänhet är ett stort antal kolonier (ungefär 30-300) replikpläterade på grund av svårigheten att stryka ut var och en individuellt på en separat platta.
Syftet med replikplätering är att kunna jämföra huvudplattan och eventuella sekundära plattor, vanligtvis för att screena efter en önskad fenotyp . Till exempel, när en koloni som fanns på den primära tallriken (eller huvudskålen), inte visas på en sekundär tallrik, visar det att kolonin var känslig för ett ämne på just den sekundära tallriken. Vanliga screenbara fenotyper inkluderar auxotrofi och antibiotikaresistens .
Replikplätering är särskilt användbar för " negativt urval ". Det är dock mer korrekt att hänvisa till "negativ screening" istället för att använda termen "urval". Till exempel, om man ville välja kolonier som var känsliga för ampicillin , kan den primära plattan replika utsträckas på en sekundär Amp + agarplatta. De känsliga kolonierna på den sekundära plattan skulle dö men kolonierna kunde fortfarande härledas från den primära plattan eftersom de två har samma rumsliga mönster från ampicillinresistenta kolonier. De känsliga kolonierna kunde sedan plockas bort från den primära plattan. Ofta är den sista plattan icke-selektiv. I figuren kommer en icke-selektiv platta att replika pläteras efter Amp+-plattan för att bekräfta att frånvaron av tillväxt på den selektiva plattan beror på själva urvalet och inte ett problem med att överföra celler. Om man ser tillväxt på den tredje (icke-selektiva) plattan men inte den andra, är det selektiva medlet ansvarigt för bristen på tillväxt. Om den icke-selektiva plattan inte visar någon tillväxt kan man inte säga om livsdugliga celler överhuvudtaget överfördes, och inga slutsatser kan dras om närvaron eller frånvaron av tillväxt på selektiva medier. Detta är särskilt användbart om det finns frågor om ålder eller livsduglighet hos cellerna på originalplattan.
Genom att öka variationen av sekundära plattor med olika selektiva tillväxtmedier är det möjligt att snabbt screena ett stort antal individuella isolerade kolonier för lika många fenotyper som det finns sekundära plattor.
Utvecklingen av replikplätering krävde två steg. Det första steget var att definiera problemet: en metod för identifierbart duplicering av kolonier. Det andra steget var att ta fram ett sätt att på ett tillförlitligt sätt implementera det första steget. Replikplätering beskrevs först av Esther Lederberg och Joshua Lederberg 1952. Lederberg försökte använda ett tyg som kunde steriliseras och hade en vertikal tygstapel , liknar en 2D-analog "trådborste" som hade använts klassiskt för att överföra kolonier. Papper var otillfredsställande eftersom "dess laterala kapilläritet och dess komprimering av kolonierna förvrängde och bröt upp det ursprungliga tillväxtmönstret." och nylonsammet var för dyrt och dess styvare fibrer orsakade problem, vilket ledde till valet och slutligen standardiseringen av bomullssammet. Även om den först demonstrerades med bakterier , har sammetsbaserad replikplätering också blivit en standardteknik i mikrobiologin för eukaryoter , såsom jäst .