Protein L
| Protein L b1-domän | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
 Struktur av protein L som binder till den lätta kedjan av en murin Fab ().
| |||||||||||
| Identifierare | |||||||||||
| Symbol | PpL | ||||||||||
| Pfam | PF02246 | ||||||||||
| InterPro | IPR003147 | ||||||||||
| SCOP2 | 1MHH / SCOPe / SUPFAM | ||||||||||
| |||||||||||
Protein L isolerades först från ytan av bakteriearter Peptostreptococus magnus och befanns binda immunglobuliner genom L- kedjeinteraktion, varifrån namnet föreslogs. Den består av 719 aminosyrarester. Molekylvikten för Protein L renat från cellväggarna av Peptostreptoccus magnus uppskattades först till 95 kD med SDS-PAGE i närvaro av reduktionsmedel 2-merkaptoetanol, medan molekylvikten bestämdes till 76 kD genom gelkromatografi i närvaro av 6 M guanidin HCl. Protein L innehåller inga disulfidslingor mellan kedjorna och inte heller består det av disulfidkopplade subenheter. Det är en sur molekyl med ett pI på 4,0. Till skillnad från Protein A och Protein G , som binder till Fc-regionen av immunglobuliner ( antikroppar ), binder Protein L antikroppar genom lätta kedjeinteraktioner . Eftersom ingen del av den tunga kedjan är inblandad i bindningsinteraktionen, binder Protein L ett större antal antikroppsklasser än protein A eller G. Protein L binder till representanter för alla antikroppsklasser, inklusive IgG , IgM , IgA , IgE och IgD . Enkelkedjiga variabla fragment ( scFv ) och Fab-fragment binder också till protein L.
Trots detta breda bindningsintervall är Protein L inte ett universellt antikroppsbindande protein . Protein L-bindning är begränsad till de antikroppar som innehåller lätta kappa-kedjor. Hos människor och möss innehåller de flesta antikroppsmolekyler kappa (κ) lätta kedjor och resten har lambda (λ) lätta kedjor. Protein L är endast effektivt för att binda vissa subtyper av lätta kappa-kedjor. Till exempel binder den humana VκI, VκIII och VκIV subtyper men binder inte VκII subtypen. Bindning av mus-immunoglobuliner är begränsad till de som har lätta VKI-kedjor.
effektiv bindning är huvudapplikationen för immobiliserat protein L rening av monoklonala antikroppar från ascites eller cellkultursupernatant som är kända för att ha den lätta kappakedjan . Protein L är extremt användbart för rening av VLK-innehållande monoklonala antikroppar från kultursupernatant eftersom det inte binder bovina immunoglobuliner, som ofta finns i media som ett serumtillskott . Protein L interfererar inte heller med antikroppens antigenbindningsställe, vilket gör det användbart för immunoutfällningsanalyser , även med användning av IgM.
Gen för protein L
Genen för protein L innehåller fem komponenter: en signalsekvens på 18 aminosyror; en NH2-terminal region ("A") med 79 rester; fem homologa "B"-upprepningar med 72-76 aminosyror vardera; en COOH-terminalregion med två ytterligare "C"-upprepningar (52 aminosyror vardera); en hydrofil, prolinrik förmodad cellväggspännande region ("W") efter C-upprepningarna; ett hydrofobt membranankare ("M"). B-upprepningarna (36 kD) visade sig vara ansvariga för interaktionen med lätta Ig-kedjor. [2]
Andra antikroppsbindande proteiner
Förutom Protein L används andra immunglobulinbindande bakterieproteiner såsom Protein A , Protein G och Protein A/G alla för att rena, immobilisera eller detektera immunglobuliner. Vart och ett av dessa immunglobulinbindande proteiner har olika antikroppsbindningsprofil i termer av den del av antikroppen som känns igen och arten och typen av antikroppar som den kommer att binda.