Primära och sekundära antikroppar

Primära och sekundära antikroppar är två grupper av antikroppar som klassificeras baserat på om de binder till antigener eller proteiner direkt eller riktar sig mot en annan (primär) antikropp som i sin tur är bunden till ett antigen eller protein .

Primär

En primär antikropp kan vara mycket användbar för att detektera biomarkörer för sjukdomar som cancer, diabetes, Parkinsons och Alzheimers sjukdom och de används för att studera absorption, distribution, metabolism och utsöndring (ADME) och multiläkemedelsresistens (MDR) ) av terapeutiska medel.

Den primära antikroppen binder till ett antigen (i rött). En märkt sekundär antikropp (i grönt) binder sedan till den primära antikroppen. Märkningen används sedan för att indirekt detektera antigenet.

Sekundär

Sekundära antikroppar tillhandahåller signaldetektering och amplifiering tillsammans med utökar användbarheten av en antikropp genom konjugering till proteiner. Sekundära antikroppar är särskilt effektiva vid immunmärkning . Sekundära antikroppar binder till primära antikroppar, som är direkt bundna till målantigenen(erna). binder den primära antikroppens Fab-domän till ett antigen och exponerar dess Fc-domän för sekundär antikropp. Sedan binder den sekundära antikroppens Fab-domän till den primära antikroppens Fc-domän. Eftersom Fc-domänen är konstant inom samma djurklass krävs endast en typ av sekundär antikropp för att binda till många typer av primära antikroppar. Detta minskar kostnaden genom att endast märka en typ av sekundär antikropp, snarare än att märka olika typer av primära antikroppar. Sekundära antikroppar hjälper till att öka känsligheten och signalförstärkningen på grund av att flera sekundära antikroppar binder till en primär antikropp.

Hela immunoglobulinmolekylens sekundära antikroppar är det vanligaste formatet, men dessa kan bearbetas enzymatiskt för att möjliggöra analysförfining. F(ab') ₂ -fragment genereras genom pepsindigestion för att avlägsna det mesta av Fc-fragmentet, detta undviker igenkänning av Fc-receptorer på levande celler, eller för Protein A eller Protein G. Papain-digestion genererar Fab-fragment, vilket tar bort hela Fc-fragmentet inklusive gångjärnsregionen, vilket ger två monovalenta Fab-delar. De kan användas för att blockera endogena immunglobuliner på celler, vävnader eller andra ytor och för att blockera de exponerade immunglobulinerna i flera märkningsexperiment med användning av primära antikroppar från samma art.

Ansökningar

Sekundära antikroppar kan konjugeras till enzymer såsom pepparrotsperoxidas (HRP) eller alkaliskt fosfatas (AP); eller fluorescerande färgämnen såsom fluoresceinisotiocyanat (FITC), rhodaminderivat , Alexa Fluor-färgämnen ; eller andra molekyler som ska användas i olika tillämpningar. Sekundära antikroppar används i många biokemiska analyser inklusive: