Alexa Fluor
Alexa Fluor -familjen av fluorescerande färgämnen är en serie färgämnen som uppfanns av Molecular Probes , nu en del av Thermo Fisher Scientific , och säljs under varumärket Invitrogen. Alexa Fluor färgämnen används ofta som cell- och vävnadsetiketter inom fluorescensmikroskopi och cellbiologi . Alexa Fluor färgämnen kan konjugeras direkt till primära antikroppar eller till sekundära antikroppar för att förstärka signal och känslighet eller andra biomolekyler. [ citat behövs ]
Excitations- och emissionsspektra i Alexa Fluor-serien täcker det synliga spektrumet och sträcker sig in i det infraröda . De enskilda medlemmarna i familjen numreras ungefär efter deras excitationsmaxima i nanometer .
Historia
Richard och Rosaria Haugland , grundarna av Molecular Probes , är välkända inom biologi och kemi för sin forskning om fluorescerande färgämnen användbara i biologiska forskningsapplikationer. [ enligt vem? ] Vid den tidpunkt då Molecular Probes grundades, [ när? ] sådana produkter var i stort sett otillgängliga kommersiellt. [ Citat behövs ] Ett antal fluorescerande färgämnen som nu används allmänt upptäcktes och utvecklades i laboratorierna för Molecular Probes. [ citat behövs ] — färgämnen som Texas Red , Cascade Blue, Oregon Green, Marina Blue och Alexa Fluor-familjen. [ citat behövs ] Den mest kända av dessa, Alexa Fluor-familjen av färgämnen, [ enligt vem? ] utformades för att förbättra egenskaperna hos tidigare utvecklade biologiska fluorescerande färgämnesfamiljer och lösa några av de problem som de hade. [ citat behövs ] Alexa Fluor färgämnen namngavs efter Alex Haugland, son till Richard och Rosaria Haugland. [ citat behövs ]
Molecular Probes förvärvades 2003 av Invitrogen , som arbetade för att ytterligare utöka Alexa Fluor-familjen genom att lägga till nya färgämnen för att fylla luckor som inte täcks av emissionsspektrumet. 2008 blev Invitrogen och Alexa Fluor-produktlinjen en del av Life Technologies , med Applied efter Invitrogen-fusionen Biosystems . [ Citat behövs ] 2014 förvärvades Life Technologies av Thermo Fisher Scientific , som återupplivade Invitrogen- namnet och varumärket, vilket förde tillbaka Alexa Fluor-produktlinjen. [ citat behövs ]
Färgämnen och kemi
Alexa Fluor-färgämnen syntetiserades kemiskt genom sulfonering och ytterligare kemiska modifieringar gjorda på de välkända familjerna av kumarin- , rhodamin- och cyaninfärgämnen och till xantenfamiljen (som fluorescein , en industristandard, är en del av). [ citat behövs ] Sulfonering gjorde produkten Alexa Fluor färgämnen negativt laddade och därmed mer hydrofila och lösliga än deras moderfärger; [ citat behövs ] de ytterligare ändringarna syftade till att förbättra färgämnesprestanda inom andra områden. [ Citat behövs ] Till exempel, Alexa Fluor 488, en sulfonerad och annars kemiskt modifierad [ förtydligande behövs ] form av fluorescein, designades för att lösa de välkända problemen med snabb fotoblekning och pH-beroende fluorescensintensitet som är karakteristisk för färgämnet fluorescein isotiocyanat . [ citat behövs ]
| Färg † |
Absorbera (nm) |
Emit (nm) |
MM (g/mol) [ citat behövs ] |
ε (cm −1 M −1 ) |
Kvantutbyte | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 350 | Blå | 346 | 442 | 410 | 19 000 | - |
| — 405 | Blå | 401 | 421 | 1028 | 35 000 | - |
| — 430 | Grön | 434 | 541 | 702 | 15 000 | - |
| — 488 | Grön | 495 | 519 | 643 | 73 000 | 0,92 |
| — 500 | Grön | 502 | 525 | 700 | 71 000 | - |
| — 514 | Grön | 517 | 542 | 714 | 80 000 | - |
| — 532 | Gul | 532 | 554 | 721 | 81 000 | 0,61 |
| — 546 | Gul | 556 | 573 | 1079 | 112 000 | 0,79 |
| — 555 | Orange | 555 | 565 | ~1250 | 155 000 | 0,1 |
| — 568 | Orange | 578 | 603 | 792 | 88 000 | 0,69 |
| — 594 | Röd | 590 | 617 | 820 | 92 000 | 0,66 |
| — 610 | Röd | 612 | 628 | 1172 | 144 000 | - |
| — 633 | Långt rött | 632 | 647 | ~1200 | 159 000 | - |
| — 635 | Långt rött | 633 | 647 | - | 140 000 | - |
| — 647 | Långt rött | 650 | 665 | 1155,06 | 270 000 | 0,33 |
| — 660 | Nära-IR | 663 | 690 | ~1100 | 132 000 | 0,37 |
| — 680 | Nära-IR | 679 | 702 | ~1150 | 183 000 | 0,36 |
| — 700 | Nära-IR | 702 | 723 | ~1400 | 205 000 | 0,25 |
| — 750 | Nära-IR | 749 | 775 | ~1300 | 290 000 | 0,12 |
| — 790 | Nära-IR | 782 | 805 | ~1750 | 260 000 | - |
|
† = ungefärlig färg på emissionsspektrumet ε = extinktionskoefficient |
||||||
Jämförelse med andra färgämnen
Alexa Fluor-seriens färgämnen är mindre pH-känsliga och mer fotostabila än de ursprungliga färgämnena ( fluorescein , rhodamin , etc.) från vilka de syntetiserades. [ Citat behövs ] Även om extinktionskoefficienter för varje medlem av denna linje av färgämnen är kända (se tabell), är kvantutbyten [ förtydligande behövs ] och livstider [ förtydligande behövs ] inte. [ citat behövs ] Jämförelser av ljusstyrka är också generellt sett fördelaktiga. [ förtydligande behövs ] [ citat behövs ]
Andra kommersiella produktlinjer tillhandahåller alternativ till enskilda medlemmar i linjen av Alexa Fluor Dyes. [ citat behövs ] Jämförelser med andra färgämnen är mindre konsekventa, [ förtydligande behövs ] och även ännu mer "känsliga", [ förtydligande behövs ] beroende på de förhållanden och tekniker som används. [ editorializing ] [ citat behövs ] Sådana jämförelser bör övervägas, beroende på de förhållanden och tekniker som används, och färgämnesprestanda (signal, bakgrund, stabilitet) som behövs. [ editorializing ] [ citat behövs ]
Specifika jämförelsestudier
- Alexa Fluor 647 färgämne jämfört med färgämne Cy5, [ förtydligande behövs ] } i en applikation som involverar konjugering till DNA.
Vidare läsning
- NCBI Staff (2013). "Molecular Imaging and Contrast Agent Database (MICAD), 2004-2013" . NCBI.NLM.NIH.gov . Bethesda, MD. PMID 20641179 . Hämtad 1 mars 2020 . Databasposter skrivna av oberoende experter, på Alexa Fluor produktnummer 488, 647, 680, 700 och 750, såväl som andra konjugerade former.
- Hullin-Matsuda F.; Murate M.; Kobayashi T. (25 september 2018). "Proteinsonder för att visualisera sfingomyelin och ceramidfosfoetanolamin". Chem. Phys. Lipider . 216 : 132–141. doi : 10.1016/j.chemphyslip.2018.09.002 . PMID 30194925 . S2CID 52179117 . Genomgång av en lipidvisualiseringsapplikation av Alexa Fluors.
- Kozma, E.; Jayasekara, PS; Squarcialupi, L.; Paoletta, S.; Moro, S.; Federico, S.; Spalluto, G.; Jacobson, KA (1 januari 2013). "Fluorescerande ligander för adenosinreceptorer" . Bioorg. Med. Chem. Lett . 23 (1): 26–36. doi : 10.1016/j.bmcl.2012.10.112 . PMC 3557833 . PMID 23200243 . Granskning av en uppsättning fluor baserat på Alexa Fluor (AF) 488, för receptorbindningsstudier. Artikeln presenterar strukturerna för AF488 och AF532, såväl som en stor uppsättning andra standardfluoroforer Cy5 , Texas Red , EVOBlue, FITC , NBD, Dansyl , 1- Pyrene och olika Bodipy-komplex.