Aggregometri med flera elektroder
| Multipelelektrodaggregometri | |
|---|---|
 Multiplate-analysatorn
| |
| Syfte | Fastställande av trombocytfunktion |
| Test av | Helblod |
Multiplate multipel electrode aggregometri (MEA) är ett test av trombocytfunktion i helblod . Testet kan användas för att diagnostisera blodplättsrubbningar, övervaka trombocythämmande behandling och undersöks också som en potentiell prediktor för transfusionsbehov och blödningsrisk vid hjärtkirurgi.
Instrument
Multiplate MEA Analyzer (Roche Diagnostics International Ltd) har 5 kanaler för samtidig mätning av flera prover eller agonister . Instrumentet upptäcker förändring i elektrisk impedans när blodplättar samlas på metallelektroder i testkyvetten . Varje kyvett innehåller två par sensorelektroder, som var och en mäter förändringen i impedans. De dubbla sensorerna fungerar som en integrerad kvalitetskontroll, och analysen accepteras om korrelationskoefficienten för mätningarna är större än 0,98. Skillnaden mellan varje kurva och medelkurvan beräknas också, och en skillnad på mindre än 20 % accepteras. Testkyvetterna innehåller även en teflonbelagd magnetisk omrörarstav . Ökningen i impedans när aggregering sker omvandlas till aggregeringsenheter (AU) och plottas mot tiden på datorskärmen.
Prov
Tillverkaren rekommenderar användning av hirudin som antikoagulant för prover som ska testas, men studier har visat att heparin är ett bra alternativ. 300 µL blod behövs för varje analys och späds med samma mängd saltlösning . Efter pipettering av blod och saltlösning i kyvetten inkuberas testet i tre minuter innan den valda agonisten tillsätts. Testet startas sedan och trombocytaggregation registreras med cirka 0,5 sekunders intervall under sex minuter. Tre parametrar beräknas: aggregering , hastighet och area under kurvan (AUC). Aggregation (i AU) är den maximala höjden på aggregationskurvan och hastighet (i AU/min) är den maximala lutningen på kurvan . AUC är den viktigaste parametern . Den registreras i enheter (U) och påverkas av både höjden och lutningen på aggregeringskurvan, och är det bästa övergripande måttet på blodplättsaktivitet.
Multiplate-tester/reagens
| ADP | Adrenalin | Kollagen | Ristocetin | |
|---|---|---|---|---|
| P2Y- receptorhämmare eller defekt | Minskade | Vanligt | Vanligt | Vanligt |
| Adrenerg receptordefekt | Vanligt | Minskade | Vanligt | Vanligt |
| Kollagenreceptordefekt _ | Vanligt | Vanligt | Minskad eller frånvarande | Vanligt |
| Vanligt | Vanligt | Vanligt | Minskad eller frånvarande | |
| Minskade | Minskade | Minskade | Normal eller minskad |
ADP-test
Adenosindifosfat (ADP) är en trombocytagonist. När det tillsätts till saltlösningsutspätt helblod i testkyvetten stimulerar det ADP- receptorerna på blodplättarna, vilket aktiverar blodplättarna. Aktiveringen av blodplättarna leder till formförändring och degranulering, och det frigjorda innehållet i granulerna aktiverar blodplättarna ytterligare. Aktivering inducerar också en konformationsförändring i glykoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa)-receptorn, vilket ger den hög affinitet för fibrinogen . Bindning av fibrinogen till GPIIb/IIIa-receptorer leder till trombocyt-till-plätt-bryggor och resulterar i trombocytaggregation. Trombocythämmande läkemedel som klopidogrel och prasugrel hämmar irreversibelt ADP-receptorn P2Y12 , vilket leder till en minskad ADP-inducerad trombocytaggregation. Läkemedel som hämmar GPIIb/IIIa-receptorn, t.ex. eptifibatid , kan också minska eller eliminera det ADP-inducerade blodplättssvaret.
ASPItest
I ASPI-testet tillsätts arakidonsyra till det saltlösningsutspädda blodprovet. Arakidonsyra omvandlas till prostaglandin H2 (PGH2) av cyklooxygenas-1 (COX1), och PGH2 omvandlas sedan till tromboxan A2 (TXA2) av tromboxansyntas . TXA2 ökar trombocytaggregationen, främjar degranulering och stimulerar trombocytaktivering. Hämning av COX1, som med acetylsalicylsyra , och hämning eller frånvaro av GPIIb/IIIa-receptor, som ses vid Glanzmanns trombasteni , kommer att minska trombocytaggregationen som svar på arakidonsyra.
COLtest
Kollagen tillsätts till prov-saltlösningsblandningen och binder till kollagenreceptorer på blodplättar. Detta leder till frisättning av arakidonsyra, som omvandlas till den potenta trombocytaktivatorn TXA2. COLtest är känsligt för hämning av COX1 och GPIIb/IIIa och för Glanzmanns trombasteni .
RISTOtest
Ristocetin bildar komplex med von Willebrand faktor (vWF) som binder till glykoprotein Ib (GP1b) receptorer på blodplättar, vilket orsakar trombocytaktivering och aggregation. Minskad eller frånvarande aggregering som svar på ristocetin kan orsakas av brist på eller minskning av vWF, som ses vid von Willebrands sjukdom (vWD), eller avsaknad eller minskning av antalet GP1b-receptorer, som vid Bernard–Souliers syndrom (BSS). RISTOtest kan utföras i två koncentrationer; RISTOhög och RISTOlåg. I RISTOhigh appliceras en ristocetinkoncentration på 0,77 mg/ml. Detta inducerar normalt en stark trombocytaggregation, och låg eller frånvarande aggregation kan orsakas av de tidigare nämnda tillstånden vWD och BSS. I RISTOlow är ristocetinkoncentrationen bara 0,2 mg/ml, och på en nivå som normalt inte inducerar ett starkt aggregationssvar. Detta test kan upptäcka om vWF visar en starkare än normalt tendens att aggregera blodplättar, vilket kan ses i en undertyp av vWD som kallas vWDIIb.
TRAPtest
Trombinreceptoraktiverande peptid-6 (TRAP-6) aktiverar blodplättar genom den trombinreceptorproteasaktiverade receptorn-1 (PAR-1). Bindning av TRAP-6 till PAR-1 orsakar en konformationsförändring i GPIIb/IIIa-receptorerna på blodplättar, vilket ger dem hög affinitet för fibrinogen. Fibrinogen binder sedan till receptorerna, tvärbinder flera blodplättar och orsakar aggregation. Aggregation i TRAPtest kan vara reducerad eller frånvarande vid Glanzmanns trombasteni , där GPIIb/IIIa-receptorer är få eller saknas, eller om patienten tar en GPIIb/IIIa- antagonist . Traptest har endast liten känslighet för hämning av COX1 och ADP-receptorer.
ASA-reagens
Tillsats av ASA ( acetylsalicylsyra )-reagens till ett blodprov minskar aggregationssvaren i ASPItest och COLtest. ASA hämmar irreversibelt COX1 i blodplättar och hämmar därigenom produktionen av TXA2. ASA-reagenset används som en kvalitetskontroll i trombocytfunktionstestning med Multiplate, vilket möjliggör bedömning av onormala trombocytsvar i ASPItest och COLtest.
GPIIb/IIIa-antagonistreagens
Detta reagens används som en kvalitetskontroll vid testning av flerplattplättsfunktion. GPIIb/IIIa-antagonisten blockerar bindningen av fibrinogen till GPIIb/IIIa-receptorerna, vilket förhindrar bildningen av blodplätt-fibrinogenbindningar och resulterar i signifikant reducerad trombocytaggregation som svar på alla agonister. Antagonistreagenset används tillsammans med TRAP-testet och möjliggör bedömning av en positiv kontroll.
Prostaglandin E1-reagens
Prostaglandin E1 (PGE1) är en blodplättshämmare som orsakar en ökning av cykliskt adenosinmonofosfat (cAMP) i blodplättar genom att stimulera adenylylcyklasaktivitet . cAMP är en intracellulär signalmolekyl , och ökningen av cAMP hämmar kalciummobilisering och blodplättsaggregation inducerad av aktivering av ADP-receptorn P2Y1. Aktivering av P2Y1-receptorn initierar trombocytaggregation som svar på ADP. P2Y1-receptorn krävs för ADP-inducerad trombocytaktivering, men är inte tillräcklig för en fullständig trombocytaggregation som svar på ADP. cAMP hämmar trombocytaggregation, och minskade mängder cAMP i blodplättar leder till trombocytaggregation. PGE1-reagenset används tillsammans med ADP-testet i två syften: bedömning av ADP-högkänslighet (HS) och positiva kontroller av ADP-testet. När en liten mängd PGE1 (20 µl) tillsätts till ADP-testet, inducerar det en måttlig hämning av aggregation i normala prover, men ökar kraftigt trombocyternas känslighet för hämning av klopidogrel. Det är därför det modifierade testet kallas "Högkänslighet". Tillsats av 50 µl PGE1 till ADP-testet leder till en stark hämning av ADP-inducerad aggregering och används för bedömning av positiva kontroller av ADP-testet.