Vibratom
En vibratom är ett instrument som används för att skära tunna skivor av material (även om vanligtvis tjockare skivor än de som skärs i paraffininbäddade prover med hjälp av en mikrotom ). Den liknar en mikrotom men använder ett vibrerande blad för att skära igenom vävnad . Vibrationsamplituden , hastigheten och vinkeln på bladet kan alla kontrolleras . Fasta eller färska vävnadsbitar är inbäddade i agaros med låg gelningstemperatur . Det resulterande agarosblocket som innehåller vävnadsbiten fästs sedan på ett metallblock och sektioneras medan det är nedsänkt i ett vatten- eller buffertbad. Enskilda sektioner samlas sedan upp med en fin borste och överförs till objektglas eller flerbrunnsplattor för färgning.
Vibratome är inte ett generiskt namn utan ett registrerat varumärke som tillhör Leica Biosystems Richmond, Inc. i USA.
Fördelar
- Inget behov av att dehydrera vävnader före inbäddning, vilket minskar förlusten av cellbeståndsdelar
- Ingen stökig paraffininbäddning
- Tillåter inbäddning av agaros av vävnad för att ge skärstabilitet
- Inget behov av att avparaffinera och rehydrera sektioner före immunfärgning
- Inga höga temperaturer eller hårda kemiska behandlingar som kan leda till antigeninstabilitet
- Inga speciella mikrotomblad krävs
- Mindre risk för artefakter orsakade av paraffininbäddning eller frysning
- Minskad vävnadsautofluorescens på grund av undvikande av formalinfixering och paraffininbäddning
- Mindre vänteperiod från vävnadsprovtagning till tidpunkt för immunmärkning
- Möjliggör direkt skapande av fritt flytande sektioner för immunhistokemi
Nackdelar
- Istället för band klipps och samlas enstaka sektioner som är mer ömtåliga och svåra att hantera.
- Sektioner är i allmänhet tjockare än de som erhålls med paraffinmetoder; penetration av antikroppar och andra reagens kan vara långsammare och därför kan längre inkubationstider vara nödvändiga. Dessutom kan tjocka sektioner vara svåra att avbilda med mikroskopet. (Men tjocka sektioner är kompatibla och ibland till och med önskvärda om man använder konfokalmikroskopi.)
- Det kan vara svårt eller omöjligt att fästa vibratomsektioner på glasskivor på grund av sektionernas tjocklek.