Synapto-pHluorin

Synapto-pHluorin är en genetiskt kodad optisk indikator på vesikelfrisättning och återvinning. Det används inom neurovetenskap för att studera transmitterfrisättning. Den består av en pH-känslig form av grönt fluorescerande protein (GFP) smält till den luminala sidan av ett vesikelassocierat membranprotein (VAMP). Vid det sura pH-värdet inuti transmittervesiklar är synapto-pHluorin icke-fluorescerande ( släckt ). När vesiklar frigörs exponeras synapto-pHluorin för det neutrala extracellulära utrymmet och den presynaptiska terminalen blir ljust fluorescerande. Efter endocytos blir vesiklar återförsurade och cykeln kan starta igen. Kemisk alkalinisering av alla vesiklar används ofta för normalisering av synapto-pHluorin-signalerna. Synapto-pHluorin består ibland av gult fluorescerande protein (YFP) för att övervaka cytoplasman eftersom dess _pKa är högre än GFP (7,1 mot 6,0).

Historia

Synapto-pHluorin uppfanns av Gero Miesenböck 1998. 2006 publicerades en förbättrad version, med synaptophysin för att rikta GFP till vesikler. Under 2013 introducerades en tvåfärgs frigöringssensor (ratio-sypHy) för att bestämma storleken på återvinningspoolen vid enskilda synapser.

Ansökningar

Synapto-pHluorin används främst av neurobiologer för att studera transmittorfrisättning och återvinning vid presynaptiska terminaler . Det har också använts för att studera insulinutsöndring i betaceller i bukspottkörteln .