Realtidsbävningsinducerad konvertering
Realtidsskalvinducerad konvertering ( RT-QuIC ) är en mycket känslig analys för priondetektering .
Metod
"Bävningen" i teknikens namn hänvisar till det faktum att prover i RT-QuIC-analysen bokstavligen utsätts för skakning. Denna åtgärd bryter isär aggregat av prionprotein (PrP) som sedan inkuberas ytterligare, vilket amplifierar mängden felveckat PrP till detekterbara nivåer.
Det är "en tidig, snabb och specifik analys för prionsjukdomar". Den kan ta prov på flera provtyper, såsom cerebrospinalvätska (CSF), hjärna , lymfkörtlar , blod , muskler och hud , och är därför tillämpbar på scrapie hos får, kronisk slöserisjukdom (CWD) hos hjortdjur, bovin spongiform encefalopati ( BSE) hos bland annat kor och sporadisk Creutzfeldt-Jakobs sjukdom hos människor.
RT-QuIC-analysen använder i överskott rekombinant producerade normalt veckade prioner, ofta ett trunkerat syrisk hamsterprotein, aminosyrorna 90-231. Prover som misstänks innehålla felvikta prioner läggs till, vilket leder till felveckning och aggregering av normalt vikta prioner. Dessa proteinaggregat kan detekteras genom detektion av synligt spektrum av tioflavin T fluorescens . Centers for Disease Control and Prevention inkluderar ett positivt RT-QuIC-resultat i sina diagnostiska kriterier för den sannolika diagnosen sCJD.
RT-QuIC-analyser kan också användas för att testa för skrapie, BSE, CWD och sCJD. Olika procedurer kan förbättra känslighet och specificitet. Järnoxidmetallextraktion (IOME) använder den naturliga metallaffiniteten hos prionproteinet; ett prov inkuberas med magnetiska pärlor, som binder till prionproteinet. Den prionrika pärlfraktionen skördas och testas därefter.
Vanligt testade vävnader är hjärnhomogenat och lymfvävnad, men prioner har upptäckts i hud- och blodprover. Vissa vävnader kan vara svåra att testa för prioner. Till exempel tenderar blodprover att ha låga nivåer av cirkulerande intracellulära prioner, såväl som inhibitorer.