Pseudotypning

Pseudotypning är processen att producera virus eller virala vektorer i kombination med främmande virala höljeproteiner . Resultatet är en pseudotypad viruspartikel, även kallad ett pseudovirus . Med denna metod kan de främmande virala höljesproteinerna användas för att förändra värdtropism eller öka eller minska stabiliteten hos viruspartiklarna. Pseudotypade partiklar bär inte det genetiska materialet för att producera ytterligare virala höljeproteiner, så de fenotypiska förändringarna kan inte överföras till avkommans virala partiklar. I vissa fall gör oförmågan att producera virala höljeproteiner pseudovirusreplikationen inkompetent . På så sätt kan egenskaperna hos farliga virus studeras i en lägre riskmiljö.

Pseudotypning gör att man kan kontrollera uttrycket av höljeproteiner. Ett ofta använt protein är glykoproteinet G (VSV-G) från vesikulär stomatitvirus (VSV) som förmedlar inträde via LDL-receptorn . Höljeproteiner inkorporerade i pseudoviruset gör att viruset lätt kan komma in i olika celltyper med motsvarande värdreceptor .

Vaccinutveckling

Pseudotypat virus kan användas för att vaccinera djur mot proteiner uttryckta på virionens hölje. Denna metod har använts för att producera vaccinkandidater mot HIV , Nipah henipavirus , Zaire ebolavirus Rabies lyssavirus , SARS-CoV , och SARS-CoV-2 . Rekombinant vesikulär stomatitvirus – Zaire Ebola-virus (rVSV-ZEBOV) skapades av Public Health Agency of Canada (PHAC) och är för närvarande licensierad i Europeiska unionen och USA för att förebygga ebolavirussjukdom (EVD) orsakad av Zaire-ebolavirus .

Serologisk testning

Pseudotypade virus, särskilt pseudotypade virus som bär på en rekombinant luciferasgen (rLuc), kan användas för att testa om en behandling kan skydda värdcellsinfektion. Till exempel tas blod från ett djur med serologisk immunitet mot ett virus. Ett separat pseudovirus genereras med ett höljeprotein från viruset som djuret har immunitet mot. Pseudoviruset är vidare konstruerat för att innehålla en gen för luciferas. När blodet som tas från djuret blandas med pseudoviruset binder de skyddande antikropparna och neutraliserar det införda höljesproteinet. I cellodling kommer neutraliserade pseudovirus att förhindras från att infektera celler och producera den luminiscerande reportergenprodukten. När de analyseras kommer cellodlingsprover där en effektiv hämmare av viruset är närvarande att ha minskad luminescens.