NgAgo

NgAgo är ett enkelsträngat DNA (ssDNA)-styrt Argonaute- endonukleas , en akronym för N atronobacterium g regoryi A r go naute. NgAgo binder 5′- fosforylerat ssDNA av ~24 nukleotider (gDNA) för att vägleda det till dess målställe och kommer att göra DNA -dubbelsträngsbrott vid gDNA-stället. Liksom CRISPR/Cas -systemet rapporterades NgAgo av Chunyu Han et al. för att vara lämplig för genomredigering , men detta har inte replikerats. I motsats till Cas9 kräver NgAgo-gDNA-systemet inte ett protospacer angränsande motiv (PAM).

Roll

NgAgo föreslogs vara användbar för genomredigering i maj 2016 på grund av systemets höga noggrannhet och effektivitet, vilket sades minimera effekter utanför målet. Specificiteten för gDNA:t är väsentlig, eftersom klyvningseffektiviteten försämras av en enda nukleotidmissanpassning mellan guide- och målmolekylerna. Användning av 5'-fosforylerade ssDNAs som styrmolekyler minskar möjligheten att cellulära oligonukleotider vilseleder NgAgo. En guidemolekyl kan endast fästas till NgAgo under uttrycket av proteinet. När guiden väl har laddats kan NgAgo inte byta fritt flytande ssDNA mot sitt gDNA. Att designa, syntetisera och justera koncentrationen av ssDNA är lättare jämfört med system som använder sgRNA. Den erforderliga dosen av ssDNA är mindre än den för en sgRNA-expressionsplasmid.

Kontrovers

Tvivel om tekniken väcktes på genredigeringsforum redan i juni och har bestått. Det har förekommit flera anklagelser om att denna procedur är omöjlig att reproducera . Nature Biotechnology , som ursprungligen publicerade forskningen, undersöker. I november 2016 publicerades ett brev i Protein & Cell som ifrågasatte forskningen och huvudförfattarens påstående om att replikering kräver "utmärkt experimentell skicklighet". Samma månad Nature Biotechnology en kritisk korrespondensartikel av tre grupper och ett tillhörande uttryck för oro från redaktionen om den ursprungliga artikeln. Författarna drog tillbaka studien i ett uttalande publicerat i Nature Biotechnology den 3 augusti 2017, med hänvisning till den fortsatta oförmågan hos forskarsamhället att replikera sina resultat. Under 2018 drog en undersökning ledd av Hans universitet slutsatsen att även om Hans fynd var felaktiga, hade han och hans team inte för avsikt att lura det vetenskapliga samfundet. I april 2019 fann en preprint -artikel att NgAgo har förmågan att redigera gener och antydde att tidigare resultat kan ha varit svåra att reproducera på grund av svårigheter relaterade till rening av det aktiva proteinet.