Procedur för fryst snitt
Proceduren för fryst snitt är ett patologiskt laboratorieförfarande för att utföra snabb mikroskopisk analys av ett prov. Det används oftast vid onkologisk kirurgi . Det tekniska namnet för denna procedur är kryosnitt . Mikrotomanordningen som kallskuren tunna block av frusen vävnad kallas en kryotom .
Kvaliteten på objektglasen som produceras genom fryst snitt är av lägre kvalitet än formalinfixerad paraffininbäddad vävnadsbearbetning. Även om diagnos kan ställas i många fall är bearbetning av fixerad vävnad att föredra i många förhållanden för mer exakt diagnos.
Den intraoperativa konsultationen är namnet på hela ingreppet av patologen , vilket inte bara inkluderar fryst snitt utan också grov utvärdering av provet, undersökning av cytologiska preparat som tagits på provet (t.ex. beröringsavtryck) och alikvotering av provet för speciella studier (t.ex. tekniker för molekylär patologi, flödescytometri). Rapporten som ges av patologen är ofta begränsad till en "godartad" eller "elakartad" diagnos och kommuniceras till kirurgen som opererar via intercom. Vid operation av en tidigare bekräftad malignitet är patologens huvudsakliga syfte att informera kirurgen om resektionsmarginalen är fri från kvarvarande cancer, eller om kvarvarande cancer finns vid resektionsmarginalen. Metoden för bearbetning görs vanligtvis med brödlimpatekniken . Men marginalkontrollerad kirurgi ( CCPDMA ) kan utföras med en mängd olika vävnadsskärning och monteringsmetoder, inklusive Mohs-kirurgi .
Historia
Proceduren för fryst snitt som praktiseras idag i medicinska laboratorier är baserad på beskrivningen av Dr Louis B. Wilson 1905. Wilson utvecklade tekniken från tidigare rapporter på begäran av Dr William Mayo , kirurg och en av grundarna av Mayo Clinic tidigare rapporter från Dr Thomas S. Cullen vid Johns Hopkins Hospital i Baltimore involverade också fryst snitt, men först efter formalinfixering, och patologen Dr William Welch, även han vid Hopkins, experimenterade med Cullens procedur men utan kliniska konsekvenser. Därför tillskrivs Wilson i allmänhet att han verkligen varit banbrytande för proceduren (Gal & Cagle, 2005).
Procedur
Nyckelinstrumentet för kryosnitt är kryostaten , som i huvudsak är en mikrotom inuti en frys. Mikrotomen kan jämföras med en mycket exakt "deli"-skärare, som kan skära sektioner så tunna som 1 mikrometer. Den vanliga histologiskivan skärs vid 5 till 10 mikrometer. Det kirurgiska provet placeras på en metallvävnadsskiva som sedan fästs i en chuck och fryses snabbt till cirka –20 till –30 °C. Provet placeras i ett gelliknande inbäddningsmedium, vanligtvis OCT som består av polyetylenglykol och polyvinylalkohol ; denna förening är känd under många namn och när den är frusen har den samma densitet som frusen vävnad. Vid denna temperatur blir de flesta vävnader stenhårda. Vanligtvis krävs en lägre temperatur för fett- eller lipidrik vävnad. Varje vävnad har en föredragen temperatur för bearbetning. Därefter skärs den fryst med mikrotomdelen av kryostaten, sektionen plockas upp på ett objektglas och färgas (vanligtvis med hematoxylin och eosin , H &E-färgen ). Beredningen av provet är mycket snabbare än med traditionell histologiteknik (cirka 10 minuter mot 16 timmar). Den tekniska kvaliteten på sektionerna är dock mycket lägre. Hela laboratoriet kan uppta ett utrymme som är mindre än 0,84 m 2 , och minimal ventilation krävs jämfört med ett standardlaboratorium med vaxinbäddat prov. [ citat behövs ]
Steg för kryotomi:
Att sätta prover på en eller flera chuckar.
Täcker provet med inbäddningsmedium
Applicera en ledare (såvida det inte är ett tunt exemplar som måste stå på sidan)
Använd frysspray för att påskynda frysningen om tillgängligt
Bryt av eventuellt inbäddningsmedium som når under chuckens platta
Fäst chucken på kryotomen och skär relativt tjocka sektioner tills hela vävnadsytorna av intresse är exponerade
För fram provet över bladet samtidigt som du håller ned sektionen för att förhindra att den viker sig på sig själv
Fortsätt tills all vävnad av intresse är i sektionen
Att sätta en glasskiva på vävnaden.
Används
Den huvudsakliga användningen av förfarandet för fryst snitt är undersökning av vävnad medan operation pågår. Detta kan bero på olika anledningar. I utförandet av Mohs operation är det en enkel metod för realtidsmarginalkontroll av ett kirurgiskt prov. Om en tumör verkar ha metastaserat skickas ett prov av den misstänkta metastasen för kryosnitt för att bekräfta dess identitet. Detta kommer att hjälpa kirurgen att avgöra om det är någon mening med att fortsätta operationen. Vanligtvis utförs aggressiv kirurgi endast om det finns en chans att bota patienten. Om tumören har metastaserat är operation vanligtvis inte botande, och kirurgen kommer att välja en mer konservativ operation, eller ingen resektion alls. Om en tumör har resekerats men det är oklart om resektionsmarginalen är fri från tumör, begärs en intraoperativ konsultation för att bedöma behovet av att göra ytterligare resektion för fri marginal. I en vaktpostprocedur leder en vaktpostkörtel som innehåller tumörvävnad till en ytterligare lymfkörteldissektion, medan en godartad nod kommer att undvika en sådan procedur. [ citat behövs ]
Om operationen är explorativ, kan en snabb undersökning av en lesion hjälpa till att identifiera den möjliga orsaken till en patients symtom. Det är dock viktigt att notera att patologen är mycket begränsad av den dåliga tekniska kvaliteten på de frusna snitten. En slutlig diagnos erbjuds sällan intraoperativt. [ citat behövs ]
Sällan används kryosnitt för att upptäcka förekomsten av substanser som går förlorade i den traditionella histologiska tekniken, till exempel lipider. De kan också användas för att detektera vissa antigener maskerade av formalin. Kryostaten finns tillgänglig i en liten bärbar enhet som väger mindre än 80 lb (36 kg), till en stor stationär enhet 500 lb (230 kg) eller mer. Hela det histologiska laboratoriet kan bäras i en bärbar låda, vilket gör fryst snitthistologi till ett möjligt verktyg inom primitiv medicin.
Noggrannhet av diagnos
En Cochrane systematisk översikt som publicerades 2016 analyserade alla studier som rapporterade diagnostisk noggrannhet av frusna snitt hos kvinnor som genomgick operation för misstänkt tumör i äggstockarna. Granskningen drog slutsatsen att för tumörer som var tydligt antingen godartade eller maligna vid fryst snitt, var noggrannheten i diagnosen god, vilket senare bekräftades av vanlig biopsi. Tvärtom, där diagnosen fryst snitt var en borderlinetumör, varken bekräftade att inte utesluta cancer, var diagnosen mindre exakt. Granskningen tyder på att kirurger i sådana situationer av osäkerhet kan välja att utföra ytterligare operation i denna grupp kvinnor vid tidpunkten för den första operationen för att minska behovet av en andra operation, eftersom i genomsnitt en av fem av dessa kvinnor visade sig senare ha cancer.
Ultrakryotom
En ultrakryotom , som är en mycket liknande enhet som krytom, kan skära ultratunna vävnadsblock, och den vävnaden kan observeras genom transmissionselektronmikroskopi . Skärtjockleken på ultrakryotom är ungefär dussintals nanometer. De ultrastrukturella egenskaperna kan studeras utan inbäddning av vävnaden, och därför är det molekylära bevarandet bättre.
Se även
externa länkar
- JAMA patientsida om procedur för fryst avsnitt