Fosfoaminosyraanalys

Fosfoaminosyraanalys , eller PAA, är en experimentell teknik som används inom molekylärbiologi för att bestämma vilken eller vilka aminosyror som är fosforylerade i ett protein.

Metod

Ett protein fosforyleras först med användning ^av32P -märkt ATP, vanligtvis via en kinasanalys in vitro . De flesta av aminosyrorna i proteinet hydrolyseras sedan, vanligtvis genom användning av en stark syra som saltsyra . Dessa aminosyror separeras sedan med 2-dimensionell tunnskiktskromatografi , tillsammans med aminosyrastandarder för de tre aminosyrorna som är fosforylerade i eukaryoter: serin , treonin och tyrosin . Dessa aminosyrastandarder kan visualiseras på TLC-substratet genom exponering för ninhydrin , som färgar aminosyrorna en synlig lila när de värms till ~100 °C. De radioaktiva aminosyrorna kan detekteras via autoradiografi, och en överlagring av de två bilderna kommer att visa vilka aminosyror som är fosforylerade.

• Rothberg, PG, Harris, TJR, Nomoto, A. och Wimmer, E. (1978) O4-(5'-uridylyl)tyrosin är bindningen mellan det genomkopplade proteinet och RNA från poliovirus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75 , 4868-4872.
• Eckhart, W., Hutchinson, MA och Hunter, T. (1979) En aktivitet som fosforylerar tyrosin i polyoma T-antigen-immunutfällningar. Cell 18 , 925-933.