Flytdensitetscentrifugering

Elektronmikroskopbild av hundparvovirus isolerad med flyttäthetscentrifugering

Flytdensitetscentrifugering (även isopyknisk centrifugering eller jämviktsdensitetsgradientcentrifugering ) använder konceptet flytkraft för att separera molekyler i lösning genom deras skillnader i densitet.

Genomförande

Historiskt användes ofta en lösning av cesiumklorid (CsCl), men mer vanligt använda densitetsgradienter är sackaros eller Percoll . Provet läggs ovanpå lösningen och sedan snurras röret med mycket hög hastighet under en längre tid, vid tidpunkter som varar i dagar. CsCl-molekylerna blir tätt packade mot botten, så att jämna lager med olika densiteter bildas. Eftersom den ursprungliga lösningen hade ungefär samma densitet, går de till en nivå där deras densitet och CsCl-densiteten är densamma, till vilken de bildar ett skarpt, distinkt band.

Cesiumkloridlösning (CsCl) och två morfologiska typer av rotavirus . Efter centrifugering vid 100 g bildas en densitetsgradient i CsCl-lösningen och viruspartikeln separeras enligt deras densiteter.

Isotopseparation

Denna metod separerar molekyler mycket skarpt och är så skarp att den till och med kan separera olika molekylära isotoper från varandra.

DNA-separation

Flytdensiteten för majoriteten av DNA är 1,7 g/cm3 vilket är lika med densiteten för 6M CsCl-lösning. Den flytande tätheten av DNA förändras med dess GC-innehåll . Termen " satellit-DNA " avser små band av repetitiva DNA-sekvenser med distinkt bassammansättning som flyter över (A+T-rik) eller under (G+C-rik) huvudkomponent-DNA:n.

Se även

• Isopycnic
• Satellit-DNA

Vidare läsning

•    Schildkraut, Carl L.; Marmur, Julius; Doty, Paul (1962). "Bestämning av bassammansättningen av deoxiribonukleinsyra från dess flyttäthet i CsCl". Journal of Molecular Biology . 4 (6): 430–443. doi : 10.1016/S0022-2836(62)80100-4 . ISSN 0022-2836 . PMID 14498379 .
•   James Greene (25 juni 1998). Rekombinant DNA principer och metoder . CRC Tryck. s. 278–. ISBN 978-0-8247-9989-2 .