Chimärt nukleas
Chimära nukleaser är ett exempel på konstruerade proteiner som måste innefatta en DNA-bindande domän för att ge sekvensspecificitet och en nukleasdomän för DNA -klyvning.
DNA-bindande domäner
DNA-bindande domäner inklusive de grundläggande helix-loop-helix- , zinkfinger- , helix-turn-helix- och leucinblixtlåsmotiven har använts vid konstruktion av sekvensspecifika nukleaser. Av dessa har zinkfingrar föreslagits de viktigaste på grund av deras modularitet, vilket möjliggör konstruktion av en skräddarsydd DNA-bindande domän.
Nukleasdomän
Nukleasdomänen är ansvarig för fysisk klyvning av DNA-strängar och kan introducera antingen enkelsträngade eller dubbelsträngade brott. FokI är ett exempel på ett sekvensspecifikt endonukleas vars ospecifika nukleasdomän introducerar dubbelsträngade brott och har använts i en mängd olika experiment inklusive identifiering av hög- och lågaffinitetsbindningsställen för transkriptionsfaktorer in vitro , för att studera rekrytering av faktorer till promotorställen in vivo med användning av proteinpositionsidentifiering med en nukleas-svansanalys och för att studera proteiner som är specifika för interaktion med DNA i Z-DNA- konformationen (Durai et al., 2005 och referenser däri).
Se även
- ^ Durai S, Mani M, Kandavelou K, Wu J, Porteus MH, Chandrasegaran S (2005). "Zinkfingernukleaser: specialdesignade molekylära saxar för genomteknik av växt- och däggdjursceller" . Nucleic Acids Res . 33 (18): 5978–90. doi : 10.1093/nar/gki912 . PMC 1270952 . PMID 16251401 .