Puls-jaktanalys

Puls-chase-analys av auxinsignaltransduktion i en Arabidopsis thaliana- vildtyp och en axr2-1-mutant. Vildtyps- och axr2-1-plantor märktes med 35S- metionin , och AXR2/axr2-1-protein immunutfälldes antingen omedelbart efter märkningsperioden (t = 0) eller efter en 15-minuters jakt med omärkt metionin (t = 15) .

Inom biokemi och molekylärbiologi är en puls-jaktanalys en metod för att undersöka en cellulär process som sker över tid genom att successivt exponera cellerna för en märkt förening (puls) och sedan för samma förening i omärkt form (chase).

Mekanism

En utvald cell eller en grupp av celler exponeras först för en märkt förening (pulsen) som ska inkorporeras i en molekyl eller ett system som studeras (se även pulsmärkning ) . Substansen går sedan igenom de metaboliska vägarna och används i syntesen av den studerade produkten. Till exempel kan en radioaktivt märkt form av leucin ( ^3H -leucin) tillföras en grupp betaceller från bukspottkörteln , som sedan använder denna aminosyra i insulinsyntesen .

Kort efter införandet av den märkta föreningen (vanligtvis cirka 5 minuter, men den faktiska tiden som behövs beror på det studerade föremålet), införs överskott av samma, men omärkta, ämne (jakten) i miljön. Efter det föregående exemplet skulle produktionen av insulin fortsätta, men den skulle inte längre innehålla det radioaktiva leucinet som introducerades i pulsfasen och skulle inte vara synligt med radioaktiva detektionsmetoder. Rörelsen av det märkta insulinet som produceras under pulsperioden kunde dock fortfarande spåras inom cellen.

Används

Denna metod är användbar för att bestämma aktiviteten hos vissa celler under en längre tidsperiod. Metoden har använts för att studera proteinkinas C, ubiquitin och många andra proteiner. Metoden användes också för att bevisa förekomsten och funktionen av Okazaki-fragment . George Palade använde pulse-chase av radioaktiva aminosyror för att klargöra den sekretoriska vägen .