Nicking enzymamplifieringsreaktion

Nicking Enzyme Amplification Reaction (NEAR) är en metod för in vitro DNA- amplifiering som polymeraskedjereaktionen ( PCR). NEAR är isotermiskt och replikerar DNA vid en konstant temperatur med användning av ett polymeras (och nicking-enzym ) för att exponentiellt amplifiera DNA:t vid ett temperaturområde på 55 °C till 59 °C.

En nackdel med PCR är att det tar tid att linda upp dubbelsträngat DNA med värme till enkelsträngar (en process som kallas denaturering ). Detta leder till amplifieringstider typiskt trettio minuter eller mer för betydande produktion av amplifierade produkter.

Potentiella fördelar med NEAR framför PCR är ökad hastighet och lägre energikrav, egenskaper som delas med andra isotermiska amplifieringssystem. En stor nackdel med NEAR jämfört med PCR är att produktion av ospecifika amplifieringsprodukter är ett vanligt problem med isotermiska amplifieringsreaktioner.

NEAR-reaktionen använder naturligt förekommande eller konstruerade endonukleaser som introducerar ett strängbrott på endast en sträng av ett dubbelsträngat DNA-klyvningsställe. Förmågan hos flera av dessa enzymer att katalysera isotermisk DNA-amplifiering beskrevs men gjordes inte anspråk på i patenten som utfärdats för själva enzymerna.

• USA-patentansökan 20090081670. 26 mars 2009. NICKNING OCH FÖRLÄNGNINGSAMPLIFIKATIONSREAKTION FÖR EXPONENTIAL AMPLIFIKATION AV NUKLEINSYROR.