Niacin test
Niacintestet har använts flitigt sedan 1960-talet för att identifiera mykobakterier på artnivå i det kliniska laboratoriet . Niacintestet detekterar niacin ( nikotinsyra ) i vattenhaltiga extrakt från en kultur . M. tuberculosis -stammar som testar negativt för niacintestet är mycket sällsynta. Redoxreaktioner som sker hos Mycobacterium-arter producerar niacin som en del av energimetabolismen . Även om alla mykobakterier producerar niacin, M. tuberculosis ett överskott av niacin på grund av dess oförmåga att bearbeta niacin, utsöndrar överskottet av niacin i odlingsmediet, vilket gör att det kan detekteras med niacintestet. Niacintestet utförs vanligtvis endast på långsamväxande, granulära, brunfärgade kolonier, eftersom dessa är morfologiska egenskaper hos M. tuberculosis på en agarplatta . På grund av dess prisvärdhet jämfört med dyra identifieringsmetoder som pyrosequencing eller MALDI-TOF MS som kräver dyra maskiner och reagens .
Biokemiska processer
Biokemisk väg
Nedbrytningsvägen för nikotinamid-adenindinukleotid (NAD+) i M. tuberculosis har en blockad som den rensande vägen resulterar i ett överskott av niacin som inte kan bearbetas av organismen. På grund av detta överflöd M. tuberculosis tillsammans med Mycobacterium canetti och olika typer av Mycobacterium africanum ut överskottet av niacin till sin yttre miljö, i detta fall agarplattan eller annat medium. Niacin är vattenlösligt, så odlingsmediet kan testas för närvaro av niacin för att avgöra om ett Mycobacterium-isolat är en av de tre nämnda arterna. Dessa tre arter är medlemmar av Mycobacterium tuberculosis-komplexet .
Teststicksprocess
Niacintestremsan består vanligtvis av kaliumtiocyanat , kloramin-T , citronsyra och 4-aminosalicylsyra . I närvaro av citronsyra kommer kloramin-T och kaliumtiocyanat att reagera och bilda cyanogenklorid . Denna kemikalie kommer att bryta isär pyridinringen av niacin för att producera y-karboxiglutakonaldehyd och förenar en aromatisk amin för att bilda en gul färg.
Testprocedur
En niacintestremsa liknar till utseendet en pH- testremsa. Den är liten, tunn, rektangulär och vit till färgen. Vatten placeras på odlingsplattan och berörs med en teststicka i 15–20 minuter inuti ett litet, sterilt rör. Om överskott av niacin upptäcks, kommer vätskan inuti röret att gulna, ett positivt test. Om vätskan i röret är klar finns det inga överskott av niacin och testet är negativt. Ett positivt niacintest indikerar inte nödvändigtvis närvaron av M. tuberculosis eftersom andra Mycobacterium-arter kan testa positivt för överskott av niacin.
Tillsammans med varje parti prover som testas, kommer en positiv kontroll av M. tuberculosis och en negativ kontroll utan organism att inkluderas. Om den positiva kontrollen testar negativt var det troligtvis ett fel med batchen, och likaså för ett negativt test som visade positivt.
Eftersom laboratorieprover som fastställts vara syrafasta baciller möjligen är M. tuberculosis , en biosäkerhetsnivå 3- organism, måste alla niacintester utföras i ett biosäkerhetsskåp med en hel klänning, andningsskydd, handskar och förseglat laboratorium för att garantera säkerheten av labbteknologen som utför testet. Alla tester måste också utföras med steril teknik .