Motströms centrifugal elutriation

Motströms centrifugal elutriation ( CCE ) är en vätskeklarningsteknik. Denna metod gör det möjligt för forskare att separera olika celler med olika storlekar. Eftersom cellstorlek är korrelerad med cellcykelstadier tillåter denna metod också separation av celler i olika stadier av cellcykeln.

Princip

Nyckelkonceptet är att större celler tenderar att stanna inom den strömmande buffertlösningen medan mindre celler kommer att tvättas bort efter buffertlösningen (olika sedimenteringsegenskaper i buffertlösningen), och celler kommer att ha olika sedimenteringsegenskaper i olika cellcykelstadier.

Grundprincipen för att separera cellerna inuti CCE är balansen mellan centripetal och motströmsdragkraften. När cellerna går in i elutriationskammaren, kommer alla celler att stanna vid den yttre kanten av kammaren på grund av centrifugalkraften. När sedan flödeshastigheten för buffertlösningen ökar, tenderar lösningen att trycka cellerna mot mitten av CCE. När motströmningskraften överväger centripetalkraften kommer partiklar att drivas av nettokraften och lämna kammaren. Mindre partiklar kan lämna kammaren vid lägre flödeshastigheter. Däremot kommer större partiklar att stanna i elutrieringskammaren. Därför kan buffertflödeshastighet användas för att kontrollera storlekssortering i elutrieringskammaren.

Fördelar

Under separationen behöver cellen bara suspenderas i en buffertlösning och gå in i en centrifug , hela processerna involverar ingen kemisk (t.ex. färgning) eller fysisk (t.ex. fästning av antikropp, lys av cellmembran) på cellerna, så cellen kommer att förbli oförändrad före och efter separationen. På grund av detta kan de insamlade cellerna användas för ytterligare experiment eller ytterligare separation med andra tekniker. Slutligen förlitar sig CCE på centrifugalkraften och motströmningskraften för att separera cellerna, så separeringshastigheten är snabb. Sammanfattningsvis:

• Minimal effekt på cellerna
• Hög återvinningsförmåga
• Separerade celler kan användas vidare
• Snabb

Nackdelar

Som nämnts ovan separerar CCE celler baserat på deras sedimenteringsegenskaper men inte specifika egenskaper (t.ex. ytprotein, cellform). Den kan inte separera olika typer av celler som har liknande sedimenteringsegenskaper. Detta innebär att tidigare rening måste göras för blandad celltypsprov. CCE är också begränsad till celler som kan individuellt suspenderas i buffertlösningen. Celler som alltid fäster vid något kan inte separeras av CCE.