Lokal lymfkörtelanalys

Den murina lokala lymfkörtelanalysen (LLNA) är ett in vivo- test för hudsensibilisering.

LLNA har i stort sett ersatt maximeringstestet för marsvin och Buehler-testet . Det anses vara mer vetenskapligt och mindre grymt (lägre antal djur; mindre lidande) och har fått bred vetenskaplig och regulatorisk acceptans.

Principen bakom LLNA är att hudsensibilisatorer inducerar tillväxt av lymfocyter i lymfkörtlarna som dränerar appliceringsstället. Lymfocytproliferation kan mätas genom radiomärkning (kvantifiering av tritiaderad tymidin ), bioluminescens ( kvantifiering av ATP- innehåll i lymfocyter) eller immunanalys ( ELISA som använder en antikropp specifik för BrdU ).

Testmaterialet appliceras på öronen på möss. Eventuellt injiceras ett spårämne såsom 3H-metyltymidin eller BrdU intraperitonealt för lymfocytinkorporering. Djuren avlivas och deras lymfkörtelceller avlägsnas och analyseras. Förhållandet mellan inkorporering av spårämnen i lymfkörtlar från doserade djur jämförs med kontrolldjur, vilket ger ett stimuleringsindex (SI). När stimuleringsindexet överstiger 3 (SI > 3) antas en relevant sensibiliseringspotential. I motsats till de klassiska marsvinstesterna ger LLNA ett kvantitativt mått på sensibiliserande styrka hos en testad kemikalie.

LLNA kanske inte är lämplig för vissa metallföreningar, ytaktiva ämnen, högmolekylära proteiner, starka hudirriterande ämnen och material som inte fäster tillräckligt vid örat under en acceptabel tidsperiod under behandlingen. Det finns ingen absolut överensstämmelse i sensibiliseringspotentialen hos ett ämne hos mus, marsvin och människor.

Reglerande

OECD :s riktlinjer för testning av kemikalier, riktlinje nr 429 av den 23 juli 2010.

I REACH -förordningen , bilaga VII, punkt 8.3 står det "Murine Local Lymph Node Assay (LLNA) är förstahandsvalsmetoden för in vivo- testning. Endast i undantagsfall bör ett annat test användas. Motiveringen för användningen av ett annat test ska vara försedd."

Enligt European Guideline OECD 406 Skin Sensibilization kan LLNA eller MEST ( Mouse Ear swelling test ) användas som ett första steg i bedömningen av hudsensibiliseringspotential. Om ett positivt resultat ses i endera analysen kan en testsubstans betecknas som en potentiell sensibilisator och det kanske inte är nödvändigt att utföra ytterligare ett marsvinstest. Men om ett negativt resultat ses i LLNA eller MEST, måste ett marsvinstest (helst ett GPMT eller BT) utföras.