Lipofektamin
Lipofectamine eller Lipofectamine 2000 är ett vanligt transfektionsreagens som produceras och säljs av Invitrogen och används inom molekylär- och cellbiologi . Det används för att öka transfektionseffektiviteten av RNA (inklusive mRNA och siRNA ) eller plasmid- DNA till in vitro- cellkulturer genom lipofektion . Lipofektamin innehåller lipidsubenheter som kan bilda liposomer i en vattenhaltig miljö, vilka fångar transfektionsnyttolasten, t.ex. DNA-plasmider.
Lipofectamin består av en 3:1-blandning av DOSPA (2,3-dioleoyloxi-N- [2(sperminkarboxamido)etyl]-N,N-dimetyl-1-propaniminiumtrifluoracetat) och DOPE, som komplexbinder med negativt laddade nukleinsyramolekyler för att tillåta dem att övervinna den elektrostatiska repulsionen av cellmembranet. Lipofectamines katjoniska lipidmolekyler är formulerade med en neutral co-lipid (hjälparlipid). De DNA-innehållande liposomerna (positivt laddade på sin yta) kan smälta samman med det negativt laddade plasmamembranet i levande celler, på grund av den neutrala kolipidmedierande fusionen av liposomen med cellmembranet, vilket gör att nukleinsyralastmolekyler kan passera in i cytoplasma för replikering eller uttryck.
För att en cell ska kunna uttrycka en transgen måste nukleinsyran nå cellens kärna för att börja transkription . Det kan dock hända att det transfekterade genetiska materialet aldrig når kärnan i första hand, utan istället störs någonstans under leveransprocessen . I delande celler kan materialet nå kärnan genom att fångas i det återmonterande kärnhöljet efter mitos. Men även i icke-delande celler har forskning visat att Lipofectamine förbättrar effektiviteten av transfektion, vilket tyder på att det dessutom hjälper det transfekterade genetiska materialet att penetrera det intakta kärnhöljet.
Denna metod för transfektion uppfanns av Dr. Yongliang Chu.
Se även
US Active US7479573B2, Yongliang Chu; Malek Masoud & Gulliat Gebeyehu, "Transfection reagents", tilldelade Life Technologies Corp och Invitrogen Group