Kristallisationsadjutant

En kristallisationsadjutant är ett material som används för att främja kristallisation , normalt i ett sammanhang där ett material inte kristalliserar naturligt från en ren lösning.

Tillsatser i makromolekylär kristallisation

I makromolekylär kristallografi används termen tillsats istället för adjutant. En tillsats kan antingen interagera direkt med proteinet och inkorporeras i en fixerad position i den resulterande kristallen eller ha en roll i det oordnade lösningsmedlet, som i proteinkristaller utgör ungefär 50 % av gittervolymen.

Polyetylenglykoler med olika molekylvikter och salter med hög jonstyrka som ammoniumsulfat och natriumcitrat som inducerar proteinfällning när de används i höga koncentrationer klassificeras som utfällningsmedel, medan vissa andra salter som zinksulfat eller kalciumsulfat som kan orsaka att ett protein fälls ut kraftigt även när de används i små mängder anses vara adjutanter. Kristallisationsadjutanter anses vara tillsatser när de är effektiva i relativt låga koncentrationer. Skillnaden mellan buffertar och adjutanter är också flummig. Buffertmolekyler kan bli en del av gittret (till exempel HEPES inkorporeras i kristaller av humant neutrofilt kollagenas) men deras huvudsakliga användning är att upprätthålla de ganska exakta pH -kraven för kristallisering som många proteiner har. Vanligt använda buffertar som citrat har en hög jonstyrka och vid de typiska buffertkoncentrationerna fungerar de också som utfällningsmedel. Olika arter som Ca ²⁺ och Zn ²⁺ är ett biologiskt krav för att vissa proteiner ska vika sig korrekt och vissa co-faktorer behövs för att bibehålla en väldefinierad konformation. Vissa strategier, som att ersätta utfällningsmedel och buffertar med andra avsedda att ha en liknande effekt, har använts för att skilja mellan de roller som spelas i proteinkristallisation av de olika komponenterna i kristallisationslösningen.

Tillsatser för kristallisation av membranprotein

För membranproteiner är situationen mer komplicerad eftersom systemet som kristalliseras inte är själva membranproteinet utan det micellära system i vilket membranproteinet är inbäddat. Storleken på de blandade protein-tvättmedelsmicellerna påverkas av både tillsatser och rengöringsmedel , vilket kommer att starkt påverka de erhållna kristallerna. Förutom att variera koncentrationen av primära detergenter, kan tillsatser ( lipider och alkoholer ) och sekundära detergenter användas för att modulera storleken och formen på tvättmedelsmicellerna. Genom att minska storleken på de blandade micellerna uppmuntras gitterbildande protein-proteinkontakter. Lipidkubiska faser , spontana självmonterande flytande kristaller eller lipidmesofaser har använts framgångsrikt vid kristallisering av integrala membranproteiner. Temperatur, salter, tvättmedel, olika tillsatser används i detta system för att skräddarsy den kubiska fasen för att passa målproteinet. Typiska tvättmedel som används är n-dodecyl-β-d-maltopyranosid , n-decyl-β-d-glukopyranosid , lauryldimetylaminoxid LDAO, n-hexyl-β-d-glukopyranosid , n -nonyl-β-d- glukopyranosid oktyl-p-d-glukopyranosid ; de olika lipiderna är dioleoylfosfatidylkolin , dioleoylfosfatidyletanolamin och monoolein .

externa länkar